[发明专利]一种IPS细胞保存液及其制备方法

说明书

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种IPS细胞保存液及其制备方法。本发明提供了一种IPS细胞保存液，每100mL IPS细胞保存液中包括水及以下组分：白蛋白0.1‑0.5g、低分子肝素钠0.1‑0.3g、黄芪甲苷0.05‑0.15g、葡萄糖0.1‑0.3g、氯化钠0.5‑1.5g、维生素C1.0‑2.0g、甘氨酸0.2‑0.6g、醋酸钠0.4‑0.6g、醋酸0.03‑0.05g和甘油1.0‑2.0g。本发明的IPS细胞保存液保存IPS细胞72h后，细胞存活率94％，细胞结团率0.4％；同时，本发明的IPS细胞保存液成分明确，操作简单，安全性高，无毒无副作用。

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种IPS细胞保存液及其制备方法。

背景技术

IPS细胞(诱导性多能干细胞)是将一些多能遗传基因倒入皮肤等细胞中制造而成，即让普通体细胞“初始化”，使其具备干细胞功能。“IPS细胞”不仅在细胞形态、生长特性，干细胞标志物表达等方面与ES细胞(胚胎干细胞)非常相似，而且在DNA甲基化方式、基因表达谱、染色质状态、形成嵌合体动物等方面也与ES细胞几乎完全相同。IPS细胞除了不能生成胚胎以外，可以产生所有的细胞，如果用于医疗，那么理论上可以治愈所有疾病——凡是不好的组织都去除，替换为重新生长的正常组织。

中国专利CN102365933B公开了一种间充质干细胞保存液及其制备方法与应用，该间充质干细胞保存液含有占保存液体积5-15％的人AB型脐带血血浆和70-80AXaIU/mL的低分子肝素钙；所述的人AB型脐带血血浆与间充质干细胞来自同一提供者。该发明的间充质干细胞保存液能延长间充质干细胞的活性维持时间，且保存72h后，不影响其表型特征，但该发明在细胞密度较高的情况下细胞结团率较高。

中国专利申请CN105087472A公开了一种诱导多能干细胞冻存液、其应用及冻存方法，所述冻存液以IMDM/F12基础培养基为基质，每100mL诱导多能干细胞冻存液中包括以下体积浓度的组分：2～20v/v％DMSO；0.5～5v/v％右旋糖酐40；0.5～5v/v％白蛋白；1ng～1000ng Thiazovivin；余量为IMDM/F12基础培养基。该发明虽然冻存效果较好，但DMSO具有细胞毒性，与蛋白质疏水集团发生作用，导致蛋白质变性，具有血管毒性和肝肾毒性，如果低温保存的细胞复苏后直接医用，过多的DMSO对人体具有毒性，并且这种传统的冻存液要求在超低温下保存，移植前需要复苏等过程，给应用带来很多不便。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的在于提供一种IPS细胞保存液及其制备方法。本发明提供的IPS细胞保存液对IPS细胞的活力和形态具有优良的维持作用，且长期保存中细胞结团率较低，从而显著提高了IPS细胞的治疗效果。同时，本发明保存液安全性高、便于临床使用。

本发明提供了一种IPS细胞保存液，每100mL IPS细胞保存液中包括水及以下组分：

白蛋白0.1-0.5g、低分子肝素钠0.1-0.3g、黄芪甲苷0.05-0.15g、葡萄糖0.1-0.3g、氯化钠0.5-1.5g、维生素C 1.0-2.0g、甘氨酸0.2-0.6g、醋酸钠0.4-0.6g、醋酸0.03-0.05g和甘油1.0-2.0g。低分子肝素钠购于南京南大药业有限责任公司。

本发明细胞保存液对维持IPS细胞渗透压及活力有较好的作用，同时还可以有效的防止细胞的结团，利于临床的应用。经试验证实，IPS细胞保存72h后，细胞存活率94％，细胞结团率0.4％。

低分子肝素钠与普通肝素钠相比，具有半衰期长，生物活性高的优点，出血副作用少，用低分子肝素时可以不用监测凝血指标，比较安全，且抗血栓作用时间可长达24h，可用于抑制IPS细胞聚集成团。

黄芪甲苷是黄芪皂苷的主要活性成分之一，具有清除自由基延缓衰老、增强细胞生理代谢、提高氧化作用、提高细胞活性等作用，本发明采用黄芪甲苷可以延缓细胞的衰老和缓慢增殖，从而提高IPS细胞的活性。