[发明专利]一种化学发光技术检测糖化血红蛋白的方法

说明书

本发明属于分析化学领域，具体涉及一种化学发光技术检测糖化血红蛋白的方法。其原理是以鲁米诺还原氯金酸，得到鲁米诺胶体金纳米粒子LumAuNPs，以适体互补序列DNA修饰LumAuNPs，得化学发光探针；以磁珠为载体固定适体DNA，得DNA修饰磁珠；再将化学发光探针与DNA修饰磁珠孵育得化学发光传感器；在目标物糖化血红蛋白存在时，适体DNA与糖化血红蛋白作用，化学发光探针从磁珠表面脱落；经过磁分离后，在分离液中加入羟胺‑O‑磺酸，以LumAuNPs—羟胺‑O‑磺酸为化学发光体系，进行化学发光测定，根据产生的化学发光实现目标糖化血红蛋白的测定。方法具有简单、灵敏度高的优势。

技术领域

本发明属于医学检验领域，具体涉及一种化学发光技术检测糖化血红蛋白的方法。

背景技术

血红蛋白是高等生物体内负责运载氧的一种蛋白质(Hb、HGB)。血红蛋白由四条链组成，两条α链和两条β链，每一条链有一个包含一个铁原子的环状血红素。氧气结合在铁原子上，被血液运输。血红蛋白的特性是：在氧含量高的地方，容易与氧结合；在氧含量低的地方，又容易与氧分离。血红蛋白的这一特性，使红细胞具有运输氧的功能。糖化血红蛋白(HbA1c)是人体血液中红细胞内的血红蛋白与血糖结合的产物。血糖和血红蛋白的结合生成糖化血红蛋白是不可逆反应，并与血糖浓度成正比，且保持120天左右，糖化血红蛋白测试通常可以反映患者近8～12周的血糖控制情况。现阶段检测糖化血红蛋白的方法有阳离子交换色谱法、免疫分析法等。这些方法仍然有许多不足，例如所需仪器价格昂贵、操作步骤繁琐、低重现性和易受环境影响等。鉴于现有技术的不足，本发明利用适体捕获糖化血红蛋白，以LumAuNPs标记适体互补序列DNA为探针，以LumAuNPs—羟胺-O-磺酸化学发光为检测体系实现了糖化血红蛋白的测定，方法具有灵敏度高、选择性好、简单的特点。

发明内容

本发明旨在发明一种方法简单、灵敏度高的测定糖化血红蛋白的方法。

鉴于现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种化学发光技术检测糖化血红蛋白的方法。

实现本发明目的技术方案是：

一种化学发光技术检测糖化血红蛋白的方法。其原理是以鲁米诺还原氯金酸，得到鲁米诺胶体金纳米粒子LumAuNPs，以适体互补序列DNA修饰LumAuNPs，得化学发光探针；以磁珠为载体固定适体DNA，得DNA修饰磁珠；再将化学发光探针与DNA修饰磁珠孵育得化学发光传感器；在目标物糖化血红蛋白存在时，适体DNA与糖化血红蛋白作用，化学发光探针从磁珠表面脱落；经过磁分离后，在分离液中加入羟胺-O-磺酸，以LumAuNPs—羟胺-O-磺酸为化学发光体系，进行化学发光测定，根据产生的化学发光实现目标糖化血红蛋白的测定。

本发明是通过以下措施来实现的：一种化学发光技术检测糖化血红蛋白的方法，其特征是包括以下步骤：

(1)鲁米诺胶体金纳米粒子的制备；

(2)适体DNA修饰磁珠的制备；

(3)适体互补序列DNA修饰LumAuNPs的制备；

(4)糖化血红蛋白的检测。

优选的，所述的鲁米诺胶体金纳米粒子的制备包括以下步骤：

实验开始前，将所用的玻璃仪器用HNO₃/HCl(3:1,v/v)的王水浸泡24h后，用二次蒸馏水冲洗，放入烘箱烘干。取一定量的1％的氯金酸溶液加去离子水稀释成0.02％的氯金酸溶液并置于三口烧瓶中，在磁力搅拌下加热回流煮沸；待溶液沸腾后，快速加入0.01mL～5mL 0.01M的鲁米诺溶液，继续加热煮沸，溶液的颜色由浅黄色变为黑色，最后变成酒红色，40min后停止加热，并在继续搅拌下冷却至室温，得鲁米诺胶体金纳米粒子，即LumAuNPs，将制得的LumAuNPs转移到棕色广口瓶中，4℃下保存备用。

优选的，所述的适体DNA修饰磁珠的制备包括以下步骤：