[发明专利]一种桑叶免疫活性肽及其制备方法

说明书

本发明属于桑叶综合利用技术领域，提供了一种桑叶免疫活性肽及其制备方法。该方法为：以桑叶为原料，通过水提盐沉或碱提酸沉制备桑叶蛋白，再通过中性蛋白酶、碱性蛋白酶、复合蛋白酶、木瓜蛋白酶、风味蛋白酶、胰蛋白酶6种酶单独酶解或者复合酶解桑叶蛋白制备桑叶免疫活性肽粗品，并采用阴离子柱层析、Sephadex G50、G‑25或G‑15凝胶柱层析及半制备RP‑HPLC对其进行分离纯化，得到活性好，纯度高的免疫肽。此类免疫肽能够促进巨噬细胞RAW264.7分泌NO，白细胞介素IL‑6，肿瘤坏死因子TNF‑α，增强了机体对病原体入侵的抵抗能力。与此时同，此免疫活性肽可以增强RAW264.7胞饮中性红的能力。

技术领域

本发明涉及一种桑叶活性肽，特别是涉及一种桑叶免疫活性肽及其制备方法。

背景技术

免疫调节是指免疫系统中的免疫细胞与免疫分子之间、以及免疫系统与其他系统之间相互作用，使机体的免疫应答处于最合适的水平，从而维持生物体内生理动态平衡。一旦免疫调节失衡，就会引发病原微生物感染、免疫缺陷病、肿瘤及超敏反应等不良症状。因此寻找具有免疫活性的免疫分子显得尤为重要。近期研究认为，通过诸如免疫肽、免疫多糖等天然活性物质来提高机体免疫调节活性是最有希望替代抗生素治疗的方法。免疫活性肽是指一类能够通过增强机体免疫力，增强巨噬细胞吞噬能力从而提高机体抵御外来病原体感染能力的免疫功能肽。免疫活性肽作为小分子物质，能够完整的被肠道吸收或者在肠道与受体结合来发挥免疫作用，具有活性强、易吸收、稳定性强等独特的优势。目前免疫肽主要来源于动物、植物、微生物。其中植物蛋白免疫肽因具有来源广、成本低、活性高等特点而成为研究热点。目前制备的植物源免疫肽主要有大米肽、米糠肽、绿豆肽等，而叶蛋白免疫肽的研究较少。

桑树属桑科桑属植物，在我国栽培历史悠久。桑叶是桑树的叶子，国家卫生部将其列为药食两用植物。桑叶中含有丰富的蛋白质、生物碱、多糖、黄酮、酚酸等物质，具有较高的营养价值。传统蚕桑产业中桑叶主要用作蚕饲料，易出现过剩、浪费等现象，为了实现资源的最优利用，目前对桑叶中的多种成分，如多糖、酚酸、黄酮、生物碱等进行了提取并进行生理活性的分析。如中国专利CN 102370707 A用乙醇溶液制备桑叶、桑枝提取物，经大孔树脂多次洗脱分离，得到主要成分为DNJ、多糖及黄酮的桑叶/桑枝提取物，并将其用于美白及降血糖研究；中国专利CN 102771862 A用50%~70%的酸性乙醇溶液制备了具抑菌活性的桑叶酚酸提取物；中国专利CN 104274534 A用超临界萃取技术制备了全成分桑叶提取物，对其多糖含量进行了分析。目前的专利及研究主要集中在桑叶中酚类、DNJ的提取及其在降血糖、美白等药理活性中的应用，提取溶剂多为有机溶剂，产物溶解性较低。因此，需要对桑叶中更多的化学成分及生理活性进行研究，以期进一步提高桑叶的综合利用价值。

研究表明，桑叶中蛋白质含量为干基重量的15%~30%，是蛋白含量较高的植物。其氨基酸组成与脱脂大豆粉大体一致，可以用作动物饲料添加剂或食品添加剂。目前有少数文献及专利对桑叶蛋白及桑叶肽的提取优化进行了分析，而对于桑叶免疫活性肽的制备尚无研究。

发明内容

本发明的目的是为了解决上述现有桑叶活性成分及免疫肽研究存在的不足之处，提供了一种经济高效的桑叶免疫活性肽及其制备方法，所得桑叶肽具有纯度高、免疫活性高的特点。

本发明的目的通过如下方法实现：

一种桑叶免疫活性肽的制备方法，用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、复合蛋白酶、木瓜蛋白酶、风味蛋白酶、胰蛋白酶6种蛋白酶单独酶解或者复合酶解桑叶蛋白，并用DEAESepharose Fast Flow 阴离子柱层析、Sephadex G-50、G-25或G-15凝胶柱层析及RP-HPLC对其进行分离纯化制备，得到桑叶免疫活性肽；

包括以下步骤：