[发明专利]一种检测卡那霉素的比色检测探针及其检测方法

权利要求书

1.一种检测卡那霉素的比色检测探针，其特征在于：其制备方法包括如下步骤：

(1)将氨基化适配体Apt与氨基化的磁珠MB在偶联剂的作用下结合成捕获探针MB-Apt；所述氨基化适配体Apt的序列为5’-NH₂(CH₂)₆-AGA TGG GGG TTG AGG CTA AGC CGA-3’；

(2)将单链DNA结合蛋白SSB修饰到合成好的金属有机框架MOF-Pt复合材料的表面来形成信号探针MOF-Pt-SSB；

(3)将步骤1的捕获探针和步骤2的信号探针通过单链DNA结合蛋白和适配体Apt之间的亲和性形成复合探针MB-Apt-SSB-MOF-Pt。

2.根据权利要求1中的检测卡那霉素的比色检测探针，其特征在于：所述步骤(2)中的金属有机框架MOF-Pt复合材料的合成步骤为：

(1)先合成含铁金属有机骨架化合物Fe-MIL-88；

(2)再合成PVP功能化的Pt NPs；

(3)最后将步骤(2)的Pt NPs-PVP滴入步骤(1)中的Fe-MIL-88溶液中反应2～7h，PtNPs-PVP与Fe-MIL-88的配比为1:2～4:1，最后离心收集MOF-Pt复合材料；

所述步骤(1)中合成含铁金属有机骨架化合物Fe-MIL-88的方法为：分别称取0.118～0.354g对苯二甲酸和0.187～0.561g FeCl₃ 6H₂O溶于15～45mL N，N-二甲基甲酰胺中，之后加入3.45～7.90mmol醋酸溶液，油浴110～120℃反应3～4h，冷却到室温收集沉淀；

所述步骤(2)中合成PVP功能化的Pt NPs的方法为：16.6～33.2mg PVP溶解在45～60mL乙醇中，之后将5～10mL氯铂酸逐滴加入，然后在室温下搅拌反应2～5min，最后回流3～7h收集沉淀得Pt NPs-PVP。

3.一种利用如权利要求1所述的比色检测探针检测卡那霉素的方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)构建含有已知卡那霉素浓度的检测体系，绘制标准曲线；

(2)将捕获探针MB-Apt与信号探针MOF-Pt-SSB混匀孵育，制备出复合探针MB-Apt-SSB-MOF-Pt，所述捕获探针MB-Apt与信号探针MOF-Pt-SSB按1:2～1:4的比例混匀；并在4～20℃下反应12～24h形成复合探针；

(3)将步骤(2)的复合探针与待测的目标物卡那霉素混匀孵育之后磁性分离取出上清液，所述复合探针与待测的目标物卡那霉素按1:1～1:4的比例混匀；

(4)向步骤(3)中的上清液中加入50～70μL 2～7M双氧水H₂O₂和50～70μL 5～10mM3,3',5,5'-四甲基联苯胺TMB，测定混合溶液在650nm处吸光度值，并通过步骤(1)中的标准曲线来判断待测的目标物卡那霉素的含量。

4.根据权利要求3所述的比色检测探针检测卡那霉素的方法，其特征在于所述步骤(1)中的检测体系通过以下步骤制备得到：

①制备已知浓度的氯霉素检测体系：取5～10只离心管，各离心管分别加入等体积的复合探针和不同浓度的卡那霉素标准液，充分混匀后置于25～35℃条件下孵育20～40min，之后磁性分离取出上清液；

②制备空白对照体系溶液，取1支离心管将卡那霉素标准液用磷酸缓冲溶液PBS替代，其他按步骤①处理后作为空白对照体系溶液。