[发明专利]用于示踪免疫细胞的试剂盒及方法

说明书

本发明提供了一种用于示踪免疫细胞的试剂盒，其包括：KLH和人白蛋白。本发明还提供了一种免疫细胞示踪方法，其包括以下步骤：(1)用KLH标记免疫细胞，KLH使用剂量为5‑15ug/mL；(2)将标记好的免疫细胞在37℃、5％CO₂培养箱中孵育24‑48小时；(3)洗涤后配制成细胞制剂，注入外周血循环；(4)利用CT影像学在48小时内，不同时间点观察细胞的走向；(5)获得免疫细胞最终归巢所需的时间、定位的器官部位和数量。应用本发明的试剂盒和方法，可以清楚地观察到免疫细胞在体外和体内的走向、归巢。

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及用于示踪免疫细胞的试剂盒、以及示踪方法。

背景技术

基于免疫手段治疗慢性疾病和肿瘤是近年来快速发展的领域，其中特异性免疫细胞的数量和功能改善能有效控制许多慢性感染和癌症的进展，为彻底治愈创造机会和条件。免疫细胞研究是医学和生物学实验研究领域中的重要部分；然而，已有的临床研究提示，免疫细胞治疗还没有达到预期的疗效，主要原因是免疫细胞进入体内的变化情况以及到达靶器官的数量和需要的时间尚未明确，理论上认为，足够免疫细胞到达靶器官及其病灶是免疫细胞抗击感染和肿瘤的关键，因此，在临床研究前迫切需要进一步的基础研究，明确修饰后的细胞回输进入体内的走向以及靶器官的归巢现状，为进一步的临床试验提供理论依据。

大量的基础和临床实践证实，活化免疫细胞进入体内的途径有以下的方式：(1)体表淋巴结注射，免疫细胞可以通过淋巴循环进入特定组织和器官，但是淋巴结注射的细胞数量有限，同时通过淋巴结如何到达靶器官尚不能明确；(2)直接在特定靶器官的注入，该方法可以保证免疫细胞相对集中在特定的组织；但该方法复杂，一般需要手术，有创伤性；(3)向联系靶器官的深部血管注射，该方法也可保证足量的免疫细胞通过大血管进入特定器官的，但也有创伤，如大血管穿刺插管等复杂操作；(4)外周静脉内注射，操作简单，注入免疫细胞数量可控，但通过循环进入体内的免疫细胞可流至全身的各个器官，容易被某些网状内皮系统吞噬、滞留，无法估计到达靶器官的数量。因此，需要寻找一种简单、高效的免疫细胞示踪技术，通过现有的成像系统可以清楚观察外源免疫细胞注入后的路径和走向以及到达靶器官的时间和数量，有助于优化最初外周静脉给予的细胞数量。

发明内容

本发明的目的在于针对以上要解决的技术问题，提供一种能够清楚观察免疫细胞在体内的走向、归巢的试剂盒。

本发明的另一目的在于提供能够清楚观察免疫细胞在体内的走向、归巢的方法。

为此，本发明提供了如下技术方案：

一种用于示踪免疫细胞的试剂盒，其包括：KLH(Keyhole limpet hemocyanin，钥孔血蓝蛋白)和人白蛋白。

本发明还提供了一种免疫细胞示踪方法，其包括以下步骤：(1)用KLH标记免疫细胞，KLH使用剂量为5-15ug/mL；(2)将标记好的免疫细胞在37℃、5％(体积浓度)CO₂培养箱中孵育24-48小时；(3)洗涤后配制成细胞制剂，细胞浓度为2×10⁶-1×10⁷/mL，注入外周血循环；(4)利用CT影像学在48小时内，不同时间点观察细胞的走向；(5)获得免疫细胞最终归巢所需的时间、定位的器官部位和数量。

作为一种优选的实施方式，所述免疫细胞可以是天然免疫的NK细胞、T细胞、B细胞、树突状细胞(DC细胞)，可以来源于外周血、骨髓、脏器等；不同种类的免疫细胞具有特定的标记。以外周血来源的DC细胞为例，与DC细胞表面标志性抗原的特异性抗体CD11、CD86、CD83与DC细胞孵育，进行流式细胞技术鉴定DC细胞为成熟的免疫细胞，保存在DC细胞培养液中，所述DC细胞培养液成分为：AIM培养基中，含有GM-CSF 750-1000IU/mL和IL-41000-2000IU/mL。