[发明专利]一种四氧化三铁免疫纳米磁珠及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种四氧化三铁免疫纳米磁珠的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)制备纳米磁珠：

将Fe²⁺的铁盐和Fe³⁺的铁盐溶解于水中，得铁盐溶液；所述Fe²⁺的铁盐中Fe²⁺和Fe³⁺的铁盐中Fe³⁺的摩尔比为1:1-2；

在65-75℃的温度下，先超声铁盐溶液4-6分钟，再加入过量的氢氧化钠溶液并搅拌25-35分钟，再静置晶化2-3小时，得四氧化三铁沉淀；

通过磁分离将四氧化三铁沉淀分离出来，先用蒸馏水洗涤2-3次，再无水乙醇洗涤2-3次，得四氧化三铁纳米磁珠无水乙醇混合液；

(2)纳米磁珠的表面修饰：

将四氧化三铁纳米磁珠无水乙醇混合液用无水乙醇稀释5-7倍，得稀释后的纳米磁珠无水乙醇混合液；

超声振荡稀释后的纳米磁珠无水乙醇混合液25-35分钟后，加入硅烷化试剂，室温下搅拌6-8小时，磁分离，得硅烷化四氧化三铁纳米磁珠；所述硅烷化试剂为APTES；

用无水乙醇溶液洗涤硅烷化四氧化三铁纳米磁珠2-3次，得到硅烷化四氧化三铁纳米磁珠无水乙醇混合液；

再用PBS缓冲液洗涤硅烷化四氧化三铁纳米磁珠无水乙醇混合液2-3次，得磁珠混合液；

向磁珠混合液中加入戊二醛溶液,室温下振荡交联1.5-2.5小时，再磁分离，弃去上清液，得氨基化四氧化三铁纳米磁珠混合液混合液；

(3)免疫磁珠的制备：

用抗体包被氨基化四氧化三铁纳米磁珠混合液混合液，室温下振荡固定1.5-2.5小时，磁分离，得包被后的氨基化四氧化三铁纳米磁珠混合液，用蒸馏水和PBS缓冲液分别洗涤3-4次，得四氧化三铁免疫纳米磁珠；所述抗体为坚果过敏小鼠阳性血清。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，其中，

所述步骤(1)中，铁盐溶液中Fe²⁺的摩尔浓度为0.2-0.35mol/L，Fe³⁺的摩尔浓度为0.2-0.4mol/L；

所述氢氧化钠溶液的摩尔浓度为0.5-1mol/L。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，其中，

所述Fe²⁺的铁盐为FeSO₄·7H₂O，Fe³⁺的铁盐为FeCl₃·6H₂O。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，其中，

所述步骤(2)中，所述APTES与稀释后的纳米磁珠无水乙醇混合液的体积比为1:350-400；

所述戊二醛溶液的用量为硅烷化四氧化三铁纳米磁珠无水乙醇混合液的3-5倍。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，其中，

所述戊二醛溶液的体积分数为3-7％。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，其中，

所述步骤(3)中，抗体与氨基化四氧化三铁纳米磁珠混合液的体积比0.8-1.2:1。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，其中，

所述步骤(3)中，抗体的稀释度为1:600-1000。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，其中，

所述抗体的稀释度为1:800。

9.一种四氧化三铁免疫纳米磁珠的应用，其特征在于，包括：

采用酶联免疫竞争法检测抗原；其中，所述抗原为坚果过敏蛋白，所述第一抗体为四氧化三铁免疫纳米磁珠。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，其中，所述第二抗体为羊抗鼠IgE-HRP抗体。