[发明专利]一种利用鸡胚血管系统检测和评价个人护理产品和原料光毒性的方法

说明书

技术领域

本发明属于药品、化学品或化妆品光毒性技术领域，具体涉及一种利用鸡胚 血管系统检测和评价个人护理产品和原料光毒性的方法。

背景技术

随着全球工业化的快速发展，大量新合成化学品和进入生活和环境中。另一 方面，随着生活水平的提高，个人护理和家居清洁用品的市场也不断增长，细分 市场包括护肤品、护发产品、洗涤产品、空气清新剂和物体表面清洁剂等。消费 者普遍关心这些产品的安全性，刺激性、致敏性，还包括使用产品后暴露于阳光 下产生的刺激性，即产品的光毒性问题。因此，个人护理和清洁产品的监管要求 必须对产品的健康危害进行检测。同时，在这些产品的研发过程中，光毒性的检 测和评估也贯穿其中。例如对于候选原料(如表面活性剂、植物提取物、合成化 学品)和配方，通常需要反复测试其光刺激性，并希望能够精确定量不同配方或 产品的刺激程度。此外，对于大量未知毒性特征的化学品，也需要准确了解包括 光毒性在内的毒性特点，以用于危险化学品的分类和标识。

化学品、个人护理品或皮肤接触物质引起的光毒性，主要包括两类效应，分 别是光刺激性反应和光变应性反应。这两种不良反应的共同特点是都要在光照的 条件下才可能发生。光变应性是一种与免疫系统有关的变态反应，其临床表现与 变应性接触性皮炎相似。而光刺激性反应，也就是我们通常所说的光毒性是指皮 肤接触光毒性物质后，暴露于光照一段时间后出现红斑、水肿，继之色素沉着和 脱屑等临床表现，与免疫系统无关。由于卫生清洁、个人护理等产品使用频率的 增加，上述与光刺激相关的不良反应的发生越来越普遍。另一方面，消费者对于 产品安全性的要求也越来越高，因此有必要在现有的检测方法的基础上，建立一 些更快速和更敏感的检测和评估方法。

现有的外源物质光毒性的方法可分为化学法、动物模型、细胞法和人体试验 四类。

组氨酸光氧化试验是通过化学方式检测物质光毒性的方法。将受试物和组氨 酸共同溶解到溶剂中，检测混合物暴露于光照后溶液中剩余的组氨酸的量，计算 出受试物吸收组氨酸的量来判断外源化学物质的光毒性。除此之外，光敏性酵母 生长抑制试验、淋巴细胞有丝分裂抑制试验和光动力学DNA断裂活性试验等方 法也可以检测物质的光毒性。虽然化学方法操作简单，但是反应体系比较单一。 传统的动物模型皮肤光毒性试验是将一定量的受试物涂抹在实验动物(通常为大 鼠)背部去毛的皮肤上，经一定时间间隔后暴露于UVA光线下，观察受试动物 皮肤反应并确定该受试物是否有光毒性。采用动物作为试验对象检测消费品的安 全性，其缺点是成本高、周期长，很少使用现代生物科技发展的成果，还给动物 带来了极大痛苦，存在道德和伦理上的问题。除此之外，动物实验环境条件苛刻 (动物需要饲养在恒温恒湿的室内环境)、动物质量要求严格(要求符合质量等 级的要求)、检测门槛高(检测机构需要取得实验动物使用许可证)，又与人的实 际使用情况相差太远，而且由于动物和人之间存在种属差异，使用动物皮肤评价 人体皮肤的安全风险使结果的可信度降低。

随着大量新的物质用于药品和化妆品，我们需要更多的方法来评价这些物质 的安全性。在生命和医学研究中的3R原则(减少、优化和代替动物实验)的影 响下，以及在现代生物科技成果的推动下。经过30多年的发展，大量非动物替 代方法应用于健康危害的检测和安全评估中，有的方法已被世界经济合作的发展 组织(OECD)、欧洲替代方法验证中心(ECVAM)和美国替代方法部门间协调 验证中心(ICCVAM)等机构认可并定为检测指南。

目前的体外检测化学物质光毒性的方法主要是OECD指南432，即化学品体 外3T3成纤维细胞中性红摄取光毒性试验，该方法以BALB/c小鼠3T3成纤维 细胞株为模型，将细胞株与化学物质共培养并给予不引起细胞毒性的UVA照射， 加入中性红以后用酶标仪检测OD值，计算出光照下受试物的IC50和无光照下 受试物的IC50，最后光刺激因子(PIF)和平均光效应(MPE)来判断受试物的 光毒性。另外一种检测物质光毒性的细胞方法是光溶血反应法，该方法以红细胞 为测试模型，把化学物质与红细胞混合后用UVA照射，通过观察受试物对红细 胞膜的损害，计算溶血率来判断物质的光毒性程度。单层细胞模型的优点是可以 实现高通量检测，但是不适用于难溶解、有颜色的化学物，也不适用于剂型和成 份复杂的提取物、配方和成品的测试。

人体志愿者试验是评价产品安全性的最直接的方法。例如人体光斑贴试验是 将受试物直接贴在人体皮肤表面，然后用一定波长和剂量的紫外线照射一段时 间，检测使皮肤出现发红、水中或丘疹等刺激性反应的剂量，判断该受试物是否 有光毒性。