[发明专利]脐带间充质干细胞临床冻存保护液组合物及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种脐带间充质干细胞临床冻存保护液组合物及其用途，属于生物医药技术领域。

背景技术

间充质干细胞(mesenchymal stem cell，MSCs)是一类来源于中胚层及外胚层的多能干细胞，具有自我更新及多向分化潜能。研究证明，间充质干细胞可分化成为脂肪细胞、平滑肌细胞、成骨细胞、软骨细胞、肝脏细胞、神经细胞、神经胶质细胞、皮肤细胞等多种细胞类型，具有很好的损伤修复能力。间充质干细胞最早发现于骨髓，主要参与骨髓造血干细胞的定向归巢及稳态的维持。近年来，国内外研究发现间充质干细胞除具有多向分化潜能外，还具有很好的免疫调节特性，因此而被用于诸如移植物抗宿主(GvHD)、系统性红斑狼疮、关节炎，自身免疫性肠炎等多种炎症性疾病等治疗，临床应用市场巨大。

脐带间充质干细胞是一类极具应用价值的间充质干细胞，其来源于产妇废弃胎盘组织。相比传统骨髓来源间充质干细胞，脐带间充质干细胞不受个体条件影响，更具有采集方便，来源丰富，以及特性均一等特点。大量研究已尝试应用脐带间充质干细胞治疗多种疾病，并取得了理想的疗效。

将优质低代数间充质干细胞进行冻存，在必要时进行复苏扩增是间充质干细胞临床应用的必经程序。在冻存过程中有效保护间充质干细胞活性，保障间充质干细胞复苏时的活率是间充质干细胞冻存保护液及操作流程在设计时考虑的最终目的。通过冻存复苏后的脐带间充质干细胞可作为理想的种子细胞用于衰老及病变引起的组织器官损伤修复。

现有技术中使用的间充质干细胞冻存液多含有胎牛血清，胎牛血清中富含多种细胞营养因子，可用于细胞培养及冻存，能长期保持细胞活力。然而，间充质干细胞在接触胎牛血清时会内吞血清物质，当间充质干细胞回输人体后可由异源蛋白引起过敏反应，在使得间充质干细胞移植后成功率降低的同时，导致不良反应的发生，严重的可引起过敏性休克。另外，优质胎牛血清多源于进口，价格昂贵的同时，面临着携带疯牛病病毒的风险，因此胎牛血清为或临床使用批准，只能用于基础科研。

公开号为CN101919378 B的中国发明专利申请，公开了一种直接静脉应用的间充质干细胞冻存液，相关操作步骤包括:1)将人AB血置于无菌离心管中，在1000～1200rpm条件下离心15分钟；2)吸取上清液，转移入新的离心管中，在4000g条件下离心20分钟，再次取出上清即为冻存用人AB血浆；3)将二甲基亚砜(DMSO)、冻存用人AB血浆、勃脉力A注射液按体积比1:3:6混合均匀，即为间充质干细胞冻存液。由该专利文件的实施例表1可见，经该冻存液I和II分别冻存细胞1、2、3个月后复苏检测，冻存液I的细胞活率依次为96％、92.6％和89％，其细胞活率降低率为3.5％/月，冻存液II细胞活率依次为97.4％，95％和为94.7％，其细胞活率降低率为1.35％/月，该申请公开的冻存液虽然可以直接静脉输注，但细胞活率维持时间较短。并且，该间充质干细胞冻存液中含有人AB血浆，其中大量成分未知，且存在个体差异，无法保证细胞冻存的标准化及稳定性，用于异体输注存在安全隐患。另外，健康血浆来源少，成本高，难以大规模应用。

综上所述，现有技术中的细胞冻存液难以有效维持间充质干细胞活率，且不具备临床使用的条件。

发明内容

针对上述问题，本发明提供一种符合临床使用要求，且能有效保证脐带间充质干细胞活力的冻存液级冻存方法。

本发明是通过以下技术方案实现的：

本发明提供了一种脐带间充质干细胞临床冻存保护液组合物，其包括按体积百分数计的如下组分：

复方右旋糖酐40注射液：30～80％；

20wt％人血清白蛋白：10～50％；

DMSO：5～20％；

其中，所述20wt％人血清白蛋白的溶剂为生理盐水。

作为优选方案，各所述组分的体积百分数分别为：

复方右旋糖酐40注射液： 65％；

20％人血清白蛋白： 25％；

DMSO： 10％。

一种如前述的脐带间充质干细胞临床冻存保护液组合物在制备脐带间充质干细胞悬液中的用途。

作为优选方案，包括如下步骤：

利用新生儿脐带血提取充质干细胞；

将所述充质干细胞用权利要求1所述的冻存保护液组合物进行重悬，得到的细胞悬液。

作为优选方案，还包括将所述细胞悬液进行冻存的步骤，具体为：将细胞悬液放入梯度降温盒中，-80℃冰箱过夜，第2天放入液氮罐长期保存。