[发明专利]一种酵母提取制备的猪精液稀释液的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于饲养业的工艺技术领域，具体涉及到一种酵母提取制备的猪精液稀释液的制备方法。

背景技术

猪精液冷冻技术虽已成功，但是程序复杂，设备昂贵、成本高，并且受胎率偏低，目前尚未广泛推广应用。猪精液的常温保存温度为15~25℃。但是猪精子在长期的存放过程中会因为活动减弱而出现沉淀聚集，造成精子缺氧环境，引起精子窒息死亡，近年来，悬浮剂如聚乙烯吡咯烷酮或聚乙烯醇在精液的保存中应用较多，同时取得了相当好的效果。

羧甲基纤维素钠又名纤维素胶，具有独特的悬浮、稳定、增稠特性，且其来源丰富，价格便宜。具有是溶液形成均一、稳定分散系的作用，根据CMC的性质，在猪精液中加入一定量的CMC有可能减缓精子沉降的速度，延长沉时间，减少摇匀次数，提高保存质量。

糖类在精液稀释保存液中有多种作用。首先，糖类是精液稀释保存液中重要的渗透压保护剂，能够在亲水组织中替代水分子，防止精子膜结构因渗透压变化而造成损伤，有利于精子膜结构的完整，从而提高精子活力；糖类可为精子补充能量，维持细胞基本代谢，减少精子自身能量消耗，延长精子在体外的存活时间，提高精子受精能力是采用冻精进行人工授精，但受胎率较低，在60％左右且不稳定，而用常规液态保存的精液进行人工授精后效果比冻精好，且费用低操作程序简单，但是鲜精稀释保存液大多数保存时间短，给生产带来很多不便。目前，精液的保存方法主要是通过稀释后置于15~25℃中进行常温保存，由于稀释液提供的弱碱性环境，使得精子的运动能力和代谢效率受到一定的抑制，因此常温保存只能在一定的时间范围内延长精子的存活时间和保持受精能力，稀释好的精液置于22~25℃下1~2h后，平放入17℃恒温箱内闭光保存，保存的茎叶每隔4~8h摇动一次，防止底层的精子被压死。

发明内容

一种酵母提取制备的猪精液稀释液的制备方法，

本发明的主要是通过培育酵母菌细胞，然后利用现代仪器对酵母细胞进行破碎处理，释放细胞内容物，添加适量的其它活性成分配比而成的，具体是通过以下的方法实现的：

先配置浓度10~15%左右的葡萄糖水溶液500~1000ml，然后按20:1的质量比例接种活性干酵母粉，与恒温水浴锅中30~35℃活化60~80min，并每隔15~25min轻轻摇晃一次，完成后将活化液按1:100~150的比例转接到YPD液态培养基中，调整转速200r/min，28~35℃培养30~40h，得到酵母扩大培养液，富含丰富的酵母菌。

发明加入了一定量的絮凝剂羧甲基纤维素钠至其浓度为15~20g/L，并调节pH为7~9的碱性环境，于恒温水浴中保温20min，在酸性条件下酵母细胞几乎不发生絮凝现象，酵母细胞絮凝后，彼此吸附沉降有利于浓缩酵母细胞，细胞的沉降率经检测可达到惊人的70%以上，絮凝率则达到90%以上。而且根据背景技术所说，适量的加入羧甲基纤维素钠可以增加溶液一定的粘稠度，可以提高稀释液对精子的保护作用，有利于精子活率、活力的维持，同时明显提高精子脂膜完成率和顶体完整率，原理是粘稠的稀释液可以降低精子的运动能力，减少不必要的能量消耗。这里CMC的浓度至关重要，一定要满足精子的需求，达到最好稀释液保护精子的浓度，而酵母沉降的只是次要的，只要适当起到沉降的效果即可，毕竟最终稀释液是要用于猪精稀释液的配置。

沉降过后去除酵母培养液上层1/3以上的清液，将下层增稠的沉降液进行细胞的破碎及细胞活性成分的萃取，将剩余培养液置于微波功率为600~800W的电磁作用环境下2~5min，微波是通过波场中介质的摆动摩擦作用产生能量，具有很好的选择性、瞬时性和高效性，细胞内不同位置的物质，对于微波的吸收能力存在差异，从而导致为波场中的细胞局部受热，细胞在一定的强度下出现缺口而破碎，起到充分裂解酵母细胞的功能。

微波不仅可以快速使酵母细胞裂解，同时微波局部加热的方式还可以迅速的是酵母细胞中的海藻糖酶失活，导致海藻糖酶并不会酶解海藻糖，同时此加入一定量事先配置的乙醇，调制溶液的乙醇浓度为5~10%，乙醇对有机物具有溶解性，提高细胞内容物的溶出速率，毕竟最后需要对剩余的残渣进行过滤，残渣不利于猪精子的活动，尤其是顶体的完整性，乙醇的加入也可以提高海藻糖的产率，其它溶出的物质还包括：蛋白质、低分子肽、氨基酸、核酸降解物、微量元素和B族维生素等各种活性成分，只要适量的控制浓度，基本模拟了酵母细胞的内环境，属于天然的细胞存活内环境，特别适于精子的存活。