[发明专利]采用高效液相色谱法测试食品中合成着色剂的含量的方法

权利要求书

1.一种采用高效液相色谱法测试食品中合成着色剂的含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)标准系列工作溶液的制备：分别称取标准物质柠檬黄、苋菜红、靛蓝、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝、赤藓红，并将其一起转移至容量瓶中，加水和甲醇的混合溶液定容至刻度，得到标准混合溶液；经逐级稀释后得到混合标准系列工作溶液；

2)待测液的制备：液体样品加水稀释，再加入柠檬酸溶液调节pH值至3-4，得到待固相萃取柱净化的待测液；固体样品加入氨水、无水乙醇和水的混合溶液，经两次重复提取后，将得到的上清液合并，氮吹除去其中氨水和乙醇，加入柠檬酸溶液调节pH值至3-4，得到待固相萃取柱净化的待测液；

3)待测液净化：采用DiKMAProElut PWA混合型弱阴离子交换固相萃取柱，并对该萃取柱进行活化和平衡，然后将待测液上样，经淋洗和洗脱后，将洗脱液氮吹至近干，再转移至容量瓶中定容，过滤，得到净化后的待测液；

4)检测：用带有DAD检测器的高效液相色谱仪对混合标准系列工作溶液和净化后的待测液进行测试，采用梯度洗脱，并在变波长下进行检测，其中，高效液相色谱仪的流动相为乙酸铵溶液与甲醇梯度混合的混合液；以混合标准系列工作溶液的浓度为横坐标，8种合成着色剂对应的色谱峰的峰面积为纵坐标绘制标准曲线；测定待测液的色谱峰的峰面积，根据标准曲线得到待测液中8种合成着色剂的质量浓度。

2.根据权利要求1所述的采用高效液相色谱法测试食品中合成着色剂的含量的方法，其特征在于，步骤1)中水和甲醇的体积比为(0.5-2):1。

3.根据权利要求1所述的采用高效液相色谱法测试食品中合成着色剂的含量的方法，其特征在于，步骤2)中柠檬酸溶液的质量浓度为10％-30％。

4.根据权利要求1所述的采用高效液相色谱法测试食品中合成着色剂的含量的方法，其特征在于，若样品为固体样品，则步骤2)具体为：将称取的样品加入离心管中，并向离心管中加入氨水、无水乙醇、水的混合溶液，其中氨水、无水乙醇、水的体积比为(1.5-3):(6-8.5):1，涡旋混匀，超声提取，离心后将上清液过滤，重复两次提取后合并上清液，氮吹除去上清液中的氨水和乙醇，再加入柠檬酸溶液调节pH值至3-4，得到待固相萃取柱净化的待测液。

5.根据权利要求1所述的采用高效液相色谱法测试食品中合成着色剂的含量的方法，其特征在于，步骤3)中，活化所使用的溶剂为甲醇，平衡所用的溶剂为去离子水，淋洗所用的溶剂为体积比分别为1：(0.5-2)：(2-5)的甲醇、甲酸和水的混合溶剂，洗脱所用的溶剂为体积比分别为(1-3)：(5-9)：1的氨水、无水乙醇和水的混合溶剂。

6.根据权利要求1所述的采用高效液相色谱法测试食品中合成着色剂的含量的方法，其特征在于：步骤3)中上样时待测液的流速不超过1滴/s。

7.根据权利要求1所述的采用高效液相色谱法测试食品中合成着色剂的含量的方法，其特征在于，步骤3)中，定容所用的溶剂为体积比为(0.5-2)：1的甲醇和水的混合溶剂，过滤是将定容后的溶液通过直径为0.22μm的聚四氟乙烯滤膜过滤到样品瓶中。

8.根据权利要求1所述的采用高效液相色谱法测试食品中合成着色剂的含量的方法，其特征在于，高效液相色谱仪的色谱柱为C18柱，250mm×4.6mm，色谱柱内的填料的粒径为5μm。

9.根据权利要求1所述的采用高效液相色谱法测试食品中合成着色剂的含量的方法，其特征在于，梯度洗脱的程序如下表：

梯度洗脱时的柱温为35℃，混合液的流速为1.0mL/min，乙酸铵溶液的浓度为0.02mol/L。

10.根据权利要求1所述的采用高效液相色谱法测试食品中合成着色剂的含量的方法，其特征在于，变波长的程序如下表：