[发明专利]一种测定氯霉素的免疫荧光检测卡及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种测定氯霉素的免疫荧光检测卡，包括垫板，其特征在于，还包括附于所述垫板上且依次紧密相连的样品垫、耦联物垫、反应膜和吸水垫，所述耦联物垫上荧光微球标记的氯霉素抗体，所述反应膜上设有检测线和质控线，所述检测线靠近所述耦联物垫，所述质控线靠近所述吸水垫，所述检测线上包被有氯霉素抗原，所述质控线上包被有识别氯霉素抗体的二抗。

2.根据权利要求1所述的测定氯霉素的免疫荧光检测卡，其特征在于，所述免疫荧光检测卡还包括上外壳和下外壳，所述上外壳盖于所述样品垫、所述耦联物垫、所述反应膜和所述吸水垫上方，所述下外壳设于所述垫板的下方，所述上外壳和所述下外壳相互盖合，所述上外壳在对应所述样品垫的位置开设有加样孔，所述上外壳在对应所述反应膜的位置设有观察窗。

3.一种如权利要求1或2所述的测定氯霉素的免疫荧光检测卡的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

制备样品垫；

制备耦联物垫：裁剪耦联物垫膜，取荧光微球标记的氯霉素抗体喷涂在所述膜上，干燥；

制备反应膜：取反应膜，在所述反应膜上喷涂氯霉素抗原溶液，形成检测线，在所述反应膜上喷涂识别氯霉素抗体的二抗溶液，形成质控线；

组装检测卡：取吸水垫和垫板，在所述垫板上依次搭接粘贴所述样品垫、所述耦联物垫、所述反应膜和所述吸水垫。

4.根据权利要求3所述的测定氯霉素的免疫荧光检测卡的制备方法，其特征在于，所述荧光微球标记的氯霉素抗体的制备方法包括以下步骤：

(1)荧光微球活化：将待活化的荧光微球加入缓冲液中，洗涤，固液分离，弃去上清液，收集固体物质复溶于缓冲液中，向所述缓冲液中加入N-羟基琥珀酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，振荡反应，固液分离，收集固体物质并溶解于PB缓冲液中，得到荧光微球溶液；

(2)抗体标记：取氯霉素抗体溶于PBS缓冲液中，并将其加入所述荧光微球溶液中，振荡反应一段时间，加入乙醇胺振荡反应一段时间，再加入牛血清白蛋白溶液，封闭反应一段时间，固液分离，收集固体物质用PB缓冲液重新悬浮，得到荧光微球标记的氯霉素抗体。

5.根据权利要求4所述的测定氯霉素的免疫荧光检测卡的制备方法，其特征在于，所述氯霉素抗体是以氯霉素半抗原与载体蛋白的偶联物为抗原获得。

6.根据权利要求5所述的测定氯霉素的免疫荧光检测卡的制备方法，其特征在于，所述氯霉素半抗原的制备包括以下步骤：称取氯霉素、琥珀酸酐，加入丙酮、吡啶，加热回流，薄层层析检测确认产物，去除丙酮，加水，调节pH至8-10，采用乙酸乙酯萃取，去除乙酸乙酯层，水相调节pH至酸性，采用异丁醇萃取，洗涤有机相，干燥，浓缩，得到氯霉素半抗原。

7.根据权利要求5所述的测定氯霉素的免疫荧光检测卡的制备方法，其特征在于，所述载体蛋白为牛血清白蛋白。

8.根据权利要求4-7任一项所述的测定氯霉素的免疫荧光检测卡的制备方法，其特征在于，所述氯霉素抗体的制备包括以下步骤：以氯霉素半抗原与载体蛋白的偶联物为抗原，用所述抗原免疫小鼠，将免疫鼠的脾脏细胞与鼠源骨髓瘤细胞融合，筛选，得到分泌氯霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株，通过制备腹水得到氯霉素抗体。

9.一种采用权利要求1或2所述的测定氯霉素的免疫荧光检测卡进行氯霉素检测的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将待测定样品加到所述样品垫上，进行免疫反应；

(2)将测定氯霉素的免疫荧光检测卡置于荧光读卡仪上，对荧光信号的强度进行读取；

(3)结果的判断：当所述检测线和所述质控线在345nm激发光照射下同时显示橙色荧光，且所述检测线较所述质控线深或两者颜色相同或相近，即表示检测结果为阴性，说明检测物中不含有氯霉素或所含氯霉素浓度小于0.05ng/mL；当所述检测线和所述质控线在345nm激发光照射下，所述质控线显示橙色荧光，而所述检测线不显荧光或较所述质控线显色浅，即表示检测结果为阳性，说明检测物中含有氯霉素且浓度大于0.05ng/mL。