[发明专利]一种基于GQDs-CuO@3D-rGO的乙肝标志物免疫传感器的制备方法及应用

说明书

本发明属于纳米功能材料、免疫分析以及生物传感技术领域，提供了一种基于GQDs‑CuO@3D‑rGO的乙肝标志物免疫传感器的制备方法及应用。所制备的免疫传感器具有特异性强，灵敏度高和检出限低等优点，对乙肝标志物HBs、HBe的检测具有重要的科学意义和应用价值。

技术领域

本发明属于新型功能纳米材料、电化学免疫分析和生物传感技术领域，提供了一种基于GQDs-CuO@3D-rGO的乙肝标志物免疫传感器的制备方法及应用。

背景技术

HBs、HBe等标志物，对于乙型肝炎的诊断都能起到一定的作用。电化学免疫传感器结合了高特异性的免疫分析技术和高灵敏的电化学分析技术，具有灵敏度高、制备简单、检测快速、成本低等优点，在临床检验、环境监测、等领域都有重要的应用价值。

GQDs具有良好的导电性、热稳定性、分散性，能增强电子传导，同时具有较大的比表面积、小尺寸效应，以及良好的生物相容性、低毒性，使其能有效吸附固载抗体蛋白。GO表面有大量的羧基官能团，使得他容易与金属氧化物结合。三维石墨烯网3D-rGO能够有效吸附GQDs，且其三维形貌具有大的比表面积，增加GQDs和CuO的负载量。GQDs和CuO对过氧化氢均有催化作用，两者协同作用增加电子传递能力和催化性能，从而获得高强度的检测信号，提高了传感器的灵敏度。GQDs-CuO@3D-rGO通过简单的一步微波方法合成，具有良好的分散性和稳定性，能够紧密结合到巯基乙酸预处理的电沉积金电极上，因此能够保证所构建传感器的稳定性。

发明内容

本发明提供了一种基于GQDs-CuO@3D-rGO的乙肝标志物免疫传感器的制备方法及应用，实现了对乙肝标志物的灵敏检测。

本发明的目的之一是提供一种基于GQDs-CuO@3D-rGO的乙肝标志物免疫传感器的制备方法。

本发明的目的之二是将所制备的乙肝标志物免疫传感器，用于检测乙肝标志物。

本发明的技术方案，包括以下步骤。

一种基于GQDs-CuO@3D-rGO的乙肝标志物免疫传感器的制备方法，包括以下几个步骤：

（1）将直径为3 ~ 5mm的玻碳电极用Al₂O₃抛光粉打磨，超纯水清洗干净；

（2）将预处理过的电极浸入10 mL、1 mmol/L的HAuCl₄溶液中，于-0.2 V恒定电压下扫描30 s，得到电沉积金改性的电极表面，用超纯水冲洗电极表面，室温下晾干；

（3）将上述步骤（2）处理过的电极浸入10mL、10 mmol/L的巯基乙酸TGA中，室温避光反应24 h后，用超纯水冲洗电极表面，室温下晾干；

（4）继续将6 µL、2 ~ 4 mg/mL的GQDs-CuO@3D-rGO溶液滴加到电极表面，室温下晾干，用超纯水冲洗电极表面，室温下晾干；

（5）继续将6 µL、8 ~ 12 µg/mL的乙肝标志物抗体滴加到电极表面，超纯水冲洗，4℃冰箱中干燥；

（6）继续将3 µL、1.0 ~ 2.0 mg/mL的牛血清蛋白BSA溶液滴加到电极表面，用以封闭电极表面上非特异性活性位点，超纯水冲洗电极表面，4℃冰箱中晾干；滴加6 µL、0.5 ~120 ng/mL的一系列不同浓度的乙肝标志物抗原溶液，超纯水冲洗电极表面，4℃冰箱中干燥，制得一种基于GQDs-CuO@3D-rGO的乙肝标志物免疫传感器。

一种基于GQDs-CuO@3D-rGO的乙肝标志物免疫传感器的制备方法，所述GQDs-CuO@3D-rGO的制备，包括以下几个步骤：

（1）GO的制备