[发明专利]细菌或真菌的活性快速检测方法有效
申请号: | 201710348799.7 | 申请日: | 2017-05-17 |
公开(公告)号: | CN107271410B | 公开(公告)日: | 2020-04-14 |
发明(设计)人: | 吕斌;刘燕婕;李宁;叶磊;吴中乔;邓耘;项阳 | 申请(专利权)人: | 武汉汉瑞隆德检测技术有限公司 |
主分类号: | G01N21/64 | 分类号: | G01N21/64 |
代理公司: | 武汉开元知识产权代理有限公司 42104 | 代理人: | 马辉 |
地址: | 430074 湖北*** | 国省代码: | 湖北;42 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 细菌 真菌 活性 快速 检测 方法 | ||
1.一种细菌或真菌的活性快速检测方法,其特征在于:包括以下步骤:
1)制备靶细胞的荧光分子印迹聚合物:
首先称取多巴胺和丹磺酰多巴胺,配制多巴胺/丹磺酰多巴胺混合溶液;然后将多巴胺/丹磺酰多巴胺混合溶液、靶细胞和载体混合均匀,以靶细胞为模板、丹磺酰多巴胺为荧光功能单体、多巴胺为功能单体,在载体表面进行聚合反应得到靶细胞-丹磺酰多巴胺/多巴胺-载体复合体;最后利用洗脱剂将靶细胞从靶细胞-丹磺酰多巴胺/多巴胺-载体复合体上洗脱下来,得到靶细胞的荧光分子印迹聚合物;
2)检测细菌或真菌活性:
向荧光分子印迹聚合物中加入细菌或真菌样品后即刻测定荧光值为I0,待细菌或真菌样品中的细菌或真菌与荧光分子印迹聚合物结合完全后,测定荧光值为I,I0/I-1表示荧光变化水平,通过荧光变化水平确定样品中是否含有靶细菌或靶真菌以及该靶细菌或靶真菌的含量;
所述步骤1)中载体为经聚多巴胺修饰后得到的多巴胺-载体复合体,所述多巴胺-载体复合体是通过将多巴胺和载体材料混合,并在过硫酸铵催化作用下,多巴胺在载体材料表面发生自聚合反应而制得。
2.根据权利要求1所述的细菌或真菌的活性快速检测方法,其特征在于:所述载体材料为纳米微球、微米微球或多孔板。
3.根据权利要求1所述的细菌或真菌的活性快速检测方法,其特征在于:所述靶细胞为靶细菌或靶真菌,所述靶细菌为革兰氏阳性菌或革兰氏阴性菌,所述靶细菌的浓度为104~106CFU/mL。
4.根据权利要求3所述的细菌或真菌的活性快速检测方法,其特征在于:所述革兰氏阳性菌为金黄色葡萄球菌,所述革兰氏阴性菌为大肠杆菌或蜡样芽孢杆菌;所述靶真菌为酵母菌。
5.根据权利要求1所述的细菌或真菌的活性快速检测方法,其特征在于:所述多巴胺/丹磺酰多巴胺混合溶液中包括多巴胺、丹磺酰多巴胺和催化剂。
6.根据权利要求5所述的细菌或真菌的活性快速检测方法,其特征在于:所述催化剂为过硫酸铵。
7.根据权利要求6所述的细菌或真菌的活性快速检测方法,其特征在于:所述多巴胺/丹磺酰多巴胺混合溶液中多巴胺、丹磺酰多巴胺、过硫酸铵的摩尔比为4:1:1。
8.根据权利要求1所述的细菌或真菌的活性快速检测方法,其特征在于:所述洗脱剂为去离子水。
9.一种如权利要求1所述细菌的活性快速检测方法在检测水样中细菌活性及其含量的应用。
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