[发明专利]一种沼泽小叶桦离体芽快繁方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物组织培养领域，尤其涉及一种沼泽小叶桦离体芽快繁方法。

技术背景

我国大陆沿海海岸线长18000km，拥有滩涂面积21709km²，且以每年300km²的速度继续淤长。滩涂生态系统受海陆系统的双重干扰，土壤发育时间短，盐分含量高，造成了滩涂自然生态新系统的脆弱性和不稳定性。加之台风、暴雨、冰雹、龙卷风等灾害性天气频繁，每年造成的经济损失达10.6亿元，当地生态安全和社会经济发展受到严重影响。目前，沿海滩涂造林树种缺乏，大面积的滩涂处于荒芜状态，选育和引进耐盐树种成为沿海滩涂造林绿化、合理开发和利用的关键。

沼泽小叶桦为落叶小乔木，具有较强的耐盐和耐水能力，可在高盐、高水位环境下生长，在沿海和低湿地上具有应用的潜力。调查发现，我国约有500余种盐生植物，其中木本植物所占比例稀少，由于沼泽小叶桦在改造和利用盐渍土方面特性，将是优良的候选树种之一。在我国广阔的东部沿海滩涂地区，如果能将沼泽小叶桦引种到这些地区，将能丰富该地区的植被类型，改善生态环境。

然而，沼泽小叶桦是极为稀有和濒临灭绝的温带落叶阔叶树种，为国家二级重点保护濒危植物，其嫩枝扦插极难生根，目前主要采用种子繁殖，不能规模化育苗，严重限制了沼泽小叶桦的引种移栽及深入研究。因此，需要采取其他方式来提高其繁殖能力。

发明内容

本发明目的在于克服现有技术存在的外植体污染、褐化、玻璃化现象等阻碍植物组培工作的问题，提供一种繁殖速度快，生产周期短、增殖系数高且成活率高的沼泽小叶桦离体芽快繁方法，通过外植体选择及消毒、启动诱导培养、继代增殖培养、生根诱导培养、炼苗移栽等过程实现沼泽小叶桦离体快繁。

为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案为：

一种沼泽小叶桦的离体芽快繁方法，包括以下步骤：

1)挑选株高1～1.5m的未萌动的健壮植株，4～5月份采主枝顶芽、主枝侧芽、侧枝顶芽的新生芽作为外植体；

2)在超净工作台上，先用70％的酒精处理外植体20s，再用0.1％升汞消毒5～20min，10％NaClO消毒0～20min，用无菌水冲洗数次；

3)将处理好的外植体在无菌的条件下接种到初代培养基上，初代培养基成分为：MS+0.6～1.5mg/L 6-BA+0.5～1.0g/L PVP，培养20d以上；

4)将外植体转入增殖培养基，增殖培养基成分为：MS+0.4～0.6mg/L 6-BA+0.02mg/L NAA，培养时间20d以上获得小苗；

5)将小苗进行生根培养，生根培养基成分：MS+0.1～0.5mg/L NAA，或1/2MS+0～0.5mg/L NAA，培养20d以上；

7)炼苗移栽：选择健壮的无菌苗，用多菌灵溶液浸泡清洗后，移栽到已消毒的蛭石+珍珠岩的基质中，先保湿培养一周，逐渐去掉盖子。

步骤1)中，在新生芽萌动前，用50％的多菌灵可湿性粉剂喷洒植株，一周两次，直到植株吐芽、取材为止。

步骤1)中，从健壮枝条上采回新生芽，用试管刷蘸洗衣粉轻轻刷洗，流水冲洗表面污物2～3h。

步骤2)中，先用70％酒精处理20s，再配合0.1％升汞处理10min，后用无菌水冲洗4-5次。

步骤3)中，初代培养基成分为：MS+0.8～1.0mg/L 6-BA+1.0g/L PVP。

步骤4)中，增殖培养基成分为：MS+0.6mg/L 6-BA+0.02mg/L NAA，或MS+0.4mg/L 6-BA+0.02mg/L NAA。

步骤5)中，生根培养基成分：MS或1/2MS+0.1或0.5mg/L NAA。

有益效果：与现有的技术相比，本发明以沼泽小叶桦离体芽为外植体，建立了组培繁殖体系。通过酒精和升汞预处理母本材料，大大降低了外植体的污染率，使外植体成活率最高可达74.19％，污染率降为25.81％。初代培养基中添加PVP，使褐化现象消失，大大降低了组培风险，提高了成活率。本方法得到的组培苗具有增殖系数高，生根率高，栽植成活力高等特点。有利于沼泽小叶桦的保护与开发，具有广泛应用前景。

附图说明

图1是6-BA浓度过高时，初生代培养无菌苗图。

图2是取材时间对污染率的影响结果图。