[发明专利]一种恶臭假单胞菌及在制备(R)-1-(2-三氟甲基苯基)乙醇中的应用

权利要求书

1.恶臭假单胞菌（Pseudomonas putida）ZJPH1606，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期：2017年3月9日，保藏编号：CCTCC NO：M 2017110，地址：中国，武汉，武汉大学，邮编：430072。

2.一种权利要求1所述恶臭假单胞菌ZJPH1606在催化2-三氟甲基苯乙酮制备(R)-1-(2-三氟甲基苯基)乙醇中的应用。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述的应用为：以2-三氟甲基苯乙酮为底物，以恶臭假单胞菌ZJPH1606经发酵获得的湿菌体为酶源，以pH为6.0～9.0的缓冲液为反应介质构成转化体系，在25℃～35℃、200 r/min下转化反应，反应结束后，获得含(R)-1-(2-三氟甲基苯基)乙醇的反应液，将反应液经分离纯化，得到(R)-1-(2-三氟甲基苯基)乙醇。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述底物2-三氟甲基苯乙酮的初始浓度为5～100 mmol/L缓冲液，恶臭假单胞菌ZJPH1606湿菌体的添加量以缓冲液体积计为50～300g/L缓冲液。

5.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述转化体系中还添加辅助底物，所述辅助底物为下列一种或两种及以上的任意组合：葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖、甲醇、乙醇、甘油或异丙醇。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于所述辅助底物为葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖或甘油时，加入量为20~300 g/L缓冲液，辅助底物为甲醇、乙醇或异丙醇时，加入体积为缓冲液体积的10~30%。

7.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述湿菌体由如下方法获得：

（1）斜面培养：将恶臭假单胞菌ZJPH1606接种至斜面培养基，30℃培养2天，获得斜面菌体；斜面培养基终浓度组成如下：葡萄糖 10 g/L，蛋白胨5 g/L，酵母膏4 g/L，(NH₄)₂SO₄ 2g/L，KH₂PO₄ 1 g/L，NaCl 0.5 g/L，MgSO₄·7H₂O 0.5 g/L，琼脂20 g/L，溶剂为水，pH 6.5；

（2）种子培养基：从培养成熟的斜面挑一环菌体接入装有100 mL种子培养基的250 mL摇瓶中，30 ℃，200 r/min培养24小时，获得种子液；种子培养基终浓度组成：葡萄糖 10 g/L，蛋白胨5 g/L，酵母膏4 g/L，(NH₄)₂SO₄ 2 g/L，KH₂PO₄ 2 g/L，NaCl 0.5 g/L，MgSO₄·7H₂O0.5 g/L，溶剂为水，pH 6.5；

（3）发酵培养：以体积浓度8 %的接种量将种子液转接到装有60 mL发酵培养基的250mL摇瓶中，30 ℃，200 r/min培养36小时，培养结束后发酵液离心，并用pH值6.0～9.0的磷酸盐缓冲液洗涤一次，收集湿菌体；发酵培养基终浓度组成：葡萄糖20～40 g/L，牛肉膏20～40 g/L，MgSO₄·7H₂O 2.0～5.0 g/L，pH 6.0～7.5。