[发明专利]一种酶法处理麦芽糊精制备分支环糊精的方法及其应用

说明书

本发明公开了一种酶法处理麦芽糊精制备分支环糊精的方法及其应用，该方法包括如下步骤：(1)将麦芽糊精溶于磷酸盐缓冲液中，加入CGTase酶进行反应；(2)采用物理的方法降低酶活；(3)向步骤(2)的反应体系中加入糖化酶进行反应，高温灭酶，制得分支环糊精。本发明方法反应条件温和，同时利用CGTase微弱的耦合活力可以水解掉环状糊精及未反应的底物，从而实现分支环糊精的有效分离。

技术领域

本发明涉及分支环糊精的合成技术领域，尤其是涉及一种通过双酶复合法制备分支环糊精的方法及其应用。

背景技术

环糊精也称作环麦芽寡糖，是由若干α-D吡喃葡萄糖单元通过α-1,4糖苷键链接而成的一类低聚糖的总称。环糊精因其水溶性较差、具有较高的溶血性和肾毒性导致其应用收到严重的限制，因此对环糊精的改性十分必要。

环糊精的改性方法有化学法或生物酶的方法来修饰环糊精，将某些特定的取代基接枝到环糊精上，这种在保留环糊精空腔结构基本不变的情况下引入取代基团而得到的改性产物，通常称之为修饰环糊精，或改性环糊精，或环糊精衍生物。当取代基为糖基时，通常将其称之为分支环糊精，如葡萄糖基环糊精、麦芽糖基环糊精、半乳糖基环糊精和甘露糖环糊精等。

相比于环糊精，分支环糊精具有更好的水溶性、更低的肾毒性及溶血性而被广泛应用。

发明内容

针对现有技术存在的上述问题，本发明申请人提供了一种酶法处理麦芽糊精制备分支环糊精的方法。本发明方法反应条件温和，同时利用CGTase微弱的耦合活力可以水解环状糊精及未反应的底物，从而实现分支环糊精的有效分离；此外，本发明方法可延伸应用至普鲁兰酶制备分支环糊精方法的分离步骤。

本发明的技术方案如下：

一种酶法处理麦芽糊精制备分支环糊精的方法，所述方法包括如下具体步骤：

(1)将麦芽糊精溶于磷酸盐缓冲液中，加入CGTase酶反应12-24h；

(2)采用物理的方法降低酶活；

(3)向步骤(2)的反应体系中加入糖化酶反应12-24h，高温灭酶，可制得分支环糊精。

步骤(1)中所述磷酸盐缓冲液的pH在3.5-8.0。

步骤(1)中所述麦芽糊精的质量浓度为1％-5％。

步骤(2)中所述物理方法为70-100℃水浴加热。

一种所述酶法处理麦芽糊精制备分支环糊精的方法的应用，所述方法可用于制备葡萄糖基-α-环糊精、葡萄糖基-β-环糊精、葡萄糖基-γ-环糊精。

用于制备葡萄糖基-α-环糊精时，具体步骤为：

(1)将麦芽糊精溶于磷酸盐缓冲液中，加入α-CGTase酶反应12-24h；

(2)采用物理的方法降低酶活；

(3)向步骤(2)的反应体系中加入糖化酶反应12-24h，高温灭酶，可制得含有葡萄糖基-α-环糊精的混合物；

(4)利用高效液相的方法对步骤(3)所得到的混合物进行分离纯化，最终制得所述葡萄糖基-α-环糊精；

所述磷酸盐缓冲液的pH在3.5-8.0；所述麦芽糊精的质量浓度为1％-5％；所述物理方法为70-100℃水浴加热。

用于制备葡萄糖基-β-环糊精时，具体步骤为：

(1)将麦芽糊精溶于磷酸盐缓冲液中，加入β-CGTase酶反应12-24h；

(2)采用物理的方法降低酶活；