[发明专利]一种检测人粪便样本中钙卫蛋白的试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及肠道炎性疾病标志物蛋白检测试剂盒技术领域，具体涉及一种检测人粪便样本中钙卫蛋白的试剂盒及其制备方法。

背景技术

钙卫蛋白又叫MRP8/14，L1，(p8,14)，p34。由钙粒蛋白A(MRP8)和钙粒蛋白B(MRP14)两种异聚体构成。钙卫蛋白是一种钙结合蛋白，主要由嗜中性粒细胞和单核细胞分泌。粪便中的钙卫蛋白是肿瘤性和炎症性肠道疾病的标志物。钙卫蛋白水平提高预示着相应疾病的复发，如果粪便中钙卫蛋白水平很低，极大程度上说明未患有器官性肠道疾病。在临床实践中，粪便中钙卫蛋白常被用来评估肠道炎症程度、监测克罗恩病、溃疡性结肠炎或息肉摘除后病人状况以及进行粪便检查时区分炎症性肠病和肠易激综合症。

现有的检测钙卫蛋白的技术方法主要有酶联免疫学方法、化学发光方法以及利用有色微球、胶体金、荧光微球作为标记物质的免疫层析方法。这些技术方法具有各自的特点，因此其在临床应用中具有各自的优势和劣势。酶联免疫法和化学发光方法检测粪便中钙卫蛋白的产品，需要通过酶作为标记物质，与底物液进行反应，其优点是：1.检测灵敏度较高；2.精密度高，结果偏差相对较小；3.检测仪器成熟。其缺点是：1.酶促反应受温度影响较大，因此其检测过程受到温度控制限，不可应用到现场使用。2.酶、底物液为液体成分，因此储存时间较短，储存需要低温条件。3.整个免疫反应过程耗时较长，一般在1.5h以上；反应过程中需要洗涤，操作较繁琐。

在免疫层析方法中，胶体金和有色乳胶的标记物质主要通过肉眼观测判读结果，不需要任何设备辅助，但是使用该种检测方法灵敏度不高，重复性差，检测范围狭窄，不可定量检测，一般只用于对检测对灵敏度要求不高的定性项目。荧光微球是一种掺入了有机荧光分子的乳胶微球，由于采用了荧光标记，检测灵敏度要比胶体金高出10-100倍，但是由于现有技术的层析介质和装置中具有较强的荧光背景干扰，尤其是层析用到的硝酸纤维素膜(NC膜)在潮湿状态时，对激发荧光的反射作用，这些干扰都限值了荧光微球的检测灵敏度和特异性。由于大多数有机荧光分子的激发光谱和发射光谱之间斯托克位移小，在检测中需要装置滤镜以过滤激发光的信号，大大增加了检测仪器的制造成本，使得检测设备较为昂贵，限制了该技术的广泛应用。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种检测人粪便样本中钙卫蛋白的试剂盒及其制备方法，本发明所述的试剂盒检测方便快捷，检测灵敏度高，特异性强，可重复性高，检测结果客观可靠，在钙卫蛋白体外诊断领域具有广阔的应用前景。

为解决上述问题，本发明所采用的技术方案如下：

一种检测人粪便样本中钙卫蛋白的试剂盒，所述试剂盒包括盒体和设置于盒体内的检测试纸，所述检测试纸包括底板、以及由左往右依次连接并设置在所述底板上的样品垫、第一结合物垫、第二结合物垫、包被膜和吸水纸；所述第一结合物垫上含有Eu³⁺乳胶微球标记鼠抗钙卫蛋白抗体，所述第二结合物垫上含有生物素化鼠抗钙卫蛋白抗体；所述包被膜上由左往右依次设置有一条检测T线和一条质控C线，所述检测T线与质控C线平行排列，所述检测T线上包被有用于与生物素化鼠抗钙卫蛋白抗体结合的固相化链霉亲和素，所述质控C线上包被有用于与Eu³⁺乳胶微球标记鼠抗钙卫蛋白抗体结合的固相化羊抗鼠IgG抗体。

作为本发明优选的实施方式，所述包被膜的两端分别与第二结合物垫和吸水纸相互交叠连接，所述第二结合物垫上压贴有第一结合物垫，所述第一结合物垫上压贴有样品垫。

作为本发明优选的实施方式，所述样品垫为玻璃纤维垫或聚酯纤维垫。

作为本发明优选的实施方式，所述包被膜为硝酸纤维素膜。

作为本发明优选的实施方式，所述盒体上开设有向所述样品垫添加样品的加样孔和用于观察检测结果的观察窗口。

本发明还提供了一种如上所述的试剂盒的制备方法，其包括以下步骤：

1)样品垫制备：将样品垫置于样品垫处理液中浸泡或将样品垫处理液均匀喷涂在样品垫上，然后将含有样品垫处理液的样品垫置于温度为37℃、相对湿度小于20％的环境中烘干3～5h，备用；其中，样品垫处理液为含5％吐温-20、1％BSA的pH为8.0的1mol/L硼酸盐缓冲液或Tris-HCl缓冲液；