[发明专利]一种检测奶牛乳房炎抗性的分子标记及其用途

说明书

本发明提供一种检测奶牛乳房炎抗性的分子标记及其用途。所述奶牛优选是荷斯坦母牛。所述分子标记是BRCA1基因内含子14上的50439insT位点的B等位基因。荷斯坦奶牛BRCA1基因50439insT为新发现突变位点，共检测到3种基因型，其中AA基因型为优势基因型，AB型和BB型体细胞评分低于AA基因型(P0.01)。表明BRCA1基因50439insT位点的B等位基因可作为奶牛乳房炎抗性的分子标记使用。

技术领域

本发明涉及遗传育种技术领域，尤其是涉及一种用于检测奶牛乳房炎的分子标记的选择确定和应用。

背景技术

奶牛乳房炎是影响奶牛业发展的第一大疾病,遗传因素在乳房炎的发生中起着重要作用。寻找奶牛乳房炎抗性基因或者分子标记,从而进行标记辅助性选择，成为目前奶牛抗病育种研究热点。

临床乳房炎的遗传力较低，为0.01～0.10(Chu等，2012)，在奶牛育种中直接选择的效果差。奶牛体细胞数(somatic cell count,SCC)或体细胞评分(somatic cell score,SCS)遗传力为0.05-0.29(Rupp等，1999；Heringstad等，2006)，且在生产中便于记录。因此，目前常用SCS和SCC对奶牛乳房炎进行间接选择(Shook，2006；Chu等，2012；陈仁金等，2013)。乳腺癌1基因(brease cancer 1,BRCA1)在人类的研究较多，被认为是早期乳房癌症的的易感基因(Miki等，1994)，具有参与DNA损伤修复、细胞周期调控、转录调控、抑制肿瘤以及确保基因组稳定的作用(Xu等，2012)。BRCA1基因突变与乳房癌高发病率相关(Krum等，2003；Mahfoudh等，2012)。牛BRCA1基因位于19号染色体，位于或者靠近SCS数量性状位点(QTL)(Rebbeck等，1999；Kennedy等，2002；Bennewitz等，2004；Daetwyler等，2008)。

发明内容

本发明的技术目的是选择和确定用于检测奶牛乳房炎的抗性基因或分子标记，分析该突变与产奶乳房炎的相关性，以为奶牛的分子育种提供依据。

本发明首先选定牛BRCA1基因作为荷斯坦牛乳房炎抗性的有力候选基因。牛BRCA1基因多态性丰富。据NCBI报道，牛BRCA1基因SNP有2196个。经过研究发现，BRCA1基因突变与牛的乳房炎相关性很高，故而选定牛BRCA1基因。紧接着，本发明通过BRCA1基因外显子14及其侧翼序列克隆和序列比对方法挖掘该基因的多态位点，采用SNaPshot技术检测了BRCA1基因50439insT突变位点在北京郊区荷斯坦奶牛群体中的分布，并对突变位点与体细胞评分进行了关联分析。结果表明，荷斯坦奶牛BRCA1基因50439insT为新发现突变位点，共检测到3种基因型，其中AA基因型为优势基因型，AA基因型体细胞评分高于AB型和BB型(P0.01)。表明BRCA1基因50439insT位点的B等位基因可作为荷斯坦牛乳房炎抗性的分子标记使用。

在此基础上，本发明提供了牛BRCA1基因50439insT位点的B等位基因作为检测奶牛乳房炎抗性的分子标记的用途。所述奶牛优选是荷斯坦母牛。

本发明进一步提供一种用于检测奶牛乳房炎抗性的分子标记，是BRCA1基因内含子14上的50439insT位点的B等位基因。可用于乳房炎抗性的奶牛的遗传育种选育。

再进一步提供一组引物，其可特异性扩增所述的分子标记。根据一种具体的实施方式，引物的序列优选如下：

50439F：TCACATTGCTAATACTACACGTTG；

50439R：GAAGGCTTGGTCATTAGGGA；

50439Y-F：tttttttttttttttttttttttttttTTTCTATGGTGGCATCAGGC。