[发明专利]一种基因工程亚单位二联口服疫苗

说明书

技术领域

本发明属于疫苗制备技术领域，具体涉及一种基因工程亚单位二联口服疫苗。

背景技术

猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea，PED)是由尼多病毒目(Nidovirales)冠状病毒科(Coronaviridae)的猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus，PEDV)引起的以腹泻、呕吐、脱水和对哺乳仔猪高致死率为主要特征的一种冬季多发的高度接触性肠道传染病。不同年龄和不同品种的猪均易感，哺乳仔猪、架子猪或育肥猪的发病率可达100％，尤其对哺乳仔猪的危害最为严重，病死率平均为50％，给养猪业带来严重危害。

猪传染性胃肠炎(Transmissible Gastroenteritis，TGE)是由尼多目、冠状病毒科的猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible Gastroenteritis Virus，TGEV)引起的一种以腹泻、呕吐、脱水和仔猪高致死率为特征的高度接触性肠道传染病。该病具有高度传染性，猪场一旦暴发此病，而造成出生2周龄以内仔猪近乎100％死亡，损失十分严重，给养猪业带来极大危害。

猪流行性腹泻和猪传染性胃肠炎往往在寒冷季节并发于仔猪，造成仔猪腹泻、脱水、死亡，传染性强，难以治愈，因此研制这两种病毒的二联疫苗对预防猪腹泻和胃肠炎病的爆发，降低猪死亡率，减少猪场经济损失具有极其重要的意义。

疫苗免疫接种是预防这两种病的主要措施，然而现有的疫苗一般需要注射，常规注射疫苗会产生应激及疫苗吸收的问题。以往研究发现，肠道粘膜免疫所产生的分泌型抗体(sIgA)是抵抗PEDV和TGEV感染的有效抗体，如IgG、IgM的免疫保护效果并不理想。因此选择一种能在肠粘膜定居的菌作为宿主菌对于猪流行性腹泻和猪传染性胃肠炎疫苗的研制具有极其重要的意义。

乳酸乳球菌一种易通过黏膜吸收的常在菌，因其在食品工业各个领域中的长期应用已证明不具有致病性，被公认为安全级微生物。利用一些乳酸乳球菌在胃肠道、泌尿、生殖系统中或黏膜部位粘附存活且无病原性等特点，广泛开展了活菌口服后在体内定植及疫苗的研究。

目前，猪流行性腹泻和猪传染性胃肠炎发生率居高不下，发病的原因愈加复杂，且并无特效治疗药物，一般对症治疗效果不佳，所以最好接种疫苗防止暴发。然而，市面上商品化的疫苗主要为灭活苗和弱毒苗。灭活苗虽然安全稳定，但需要大剂量接种或应用浓缩抗原；免疫期短，常需强化接种；产生完全免疫力需要2周，不利于紧急预防接种与降低疫苗费用且灭活苗只能通过注射免疫，仔猪无法获得sIgA，保护效果不佳。而弱毒苗由于存在着成本高、易返祖、有潜在感染危险等缺陷，很难在实践中推广应用。传统疫苗在防治猪流行性腹泻和猪传染性胃肠炎中暴露出越来越多的问题，已无法提供完全保护，研制一种新型可靠的疫苗迫在眉睫。猪流行性腹泻和猪传染性胃肠炎的免疫机制中，黏膜免疫具有非常重要的作用。传统的非肠道输入的灭活疫苗不产生sIgA抗体，细胞介导免疫反应弱而且维持时间短。口服免疫突出的优点是可有效地刺激肠道局部免疫细胞产生分泌型IgA，这尤其适应于肠道粘膜传染病，并且避免了常规注射所引起的应激及疫苗吸收问题。

发明内容

本发明提供一种基因工程亚单位二联口服疫苗，即一种猪流行性腹泻病毒和猪传染性胃肠炎病毒基因工程亚单位二联口服疫苗，口服免疫突出的优点是可有效地刺激肠道局部免疫细胞产生分泌型IgA，这尤其适应于肠道粘膜传染病，并且避免了常规注射所引起的应激及疫苗吸收问题，解决疫苗免疫应激性强，免疫原性不强、有毒性的问题。

本发明所提供的猪流行性腹泻病毒和猪传染性胃肠炎病毒基因工程亚单位二联口服疫苗，是使用能够重组表达猪流行性腹泻病毒S蛋白和猪传染性胃肠炎病毒SLN蛋白的乳酸乳球菌制备的；

其中猪流行性腹泻病毒S蛋白，其氨基酸序列为SEQ ID NO:1；其编码基因的核苷酸序列为SEQ ID NO:2；

所述的SLN蛋白，是将猪传染性胃肠炎病毒的A、D抗原位点基因和N321抗原位点基因连接起来的，

作为优选，所述的SLN蛋白编码基因的连接顺序为D抗原位点基因、N321抗原位点基因、A抗原位点基因；

所述的D抗原位点基因、N321抗原位点基因、A抗原位点基因是通过Linker连接起来的，

作为实施例的一种具体记载，SLN蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO:3；其编码基因为SEQ ID NO:4。