[发明专利]紫草宁苯甲酰丙烯酸羧酸酯类衍生物的合成及生物活性评价

说明书

本发明属于化学制药技术领域，具体涉及一类紫草宁衍生物及其在肿瘤抑制方面的应用。通过合成手段将相应苯甲酰丙烯酸衍生物与紫草宁连接，获得相应酯类衍生物，体外抗肿瘤的活性研究表明，这类紫草宁苯甲酰丙烯酸羧酸酯类衍生物对肿瘤细胞株有很强的抑制活性。

一、技术领域

本发明属于化学制药技术领域，具体涉及一种紫草宁苯甲酰丙烯酸羧酸酯类衍生物的制备及其在肿瘤抑制方面的应用。

二、背景技术

紫草是一种重要的药用植物，属于一年生或者多年生的草本植物。其产生天然的次生代谢物紫草宁及其衍生物紫草宁具有多重药理活性，如杀菌、消炎、抗氧化、抗病毒、抗肿瘤等。近年来研究表明，它作为先导物在抑制肿瘤细胞增殖的功能分子研究方面有很大的潜力。Hyo jung L等研究紫草素及其衍生物对血管相关生长因子的活性，抑制血管生长，最终抑制肺腺癌肿瘤的生长。刘立华等对腹水型肉瘤的研究中发现，紫草宁衍生物能增强小鼠自然杀伤性细胞的活性，可以长时间内抑制肿瘤生长。同时，紫草宁衍生物SYUNZ-7(1-18)也能够抑制小鼠鼻咽癌细胞血管的再生并且呈现时间和浓度的依赖性。H.Jing等研究发现，紫草宁通过FOXO转录因子和线粒体途径以及抑制蛋白激酶ERK信号通路诱导细胞凋亡。

本课题组在多年的研究过程中，获得了多系列紫草宁衍生物，并申请了相关专利：紫草宁含氟羧酸酯类衍生物及其合成方法和应用(申请号：201110412497.4)以及紫草宁肉桂酸酯类衍生物及其合成方法和应用(申请号：201210002020.3)，发现了若干具有高效抑制肿瘤细胞活性的功能分子。

紫草宁本身具有良好的抗肿瘤活性，但是分子本身毒性较大，不利于后期临床应用。因此对紫草宁进行结构修饰，提高抗癌活性，克服其缺点，获得高效低毒的衍生物成为主要的研究课题。

三、发明内容

本发明以紫草宁为起始原料，通过半合成获得一类新颖紫草宁苯甲酰丙烯酸羧酸酯类衍生物。抗肿瘤活性表明，该衍生物对肿瘤细胞株H460、MCF-7、HeLa、A549具有明显的抑制活性，其中在A549细胞活性结果中，化合物7活性最优，IC₅₀值达到4.37±0.46μM；本发明需要解决的问题是提供一类结构新颖的紫草宁羧酸酯类衍生物及其制备方法和在肿瘤抑制中的应用。

本发明的紫草宁苯甲酰丙烯酸羧酸酯类衍生物结构式如式I所示：

本发明的式I结构紫草宁羧酸酯类衍生物是通过紫草宁与相应羧酸的半合成得到新颖的结构活性功能化合物。

本发明通过体外肿瘤细胞抑制活性证明紫草宁羧酸衍生物对MCF-7、HeLa、H460、A549具有明显的抑制活性，化合物7对四种癌细胞的抑制作用非常明显，而且对A549细胞的抑制活性最强，IC₅₀值达到4.37±0.46μM。详见附图1、2、3、4。通过毒性实验证明了这一类新颖的化合物对改造后人正常的肝细胞(L02)毒副作用低，而紫草宁和上市药物gefitinib对其毒性较大。此外，细胞凋亡实验证明，化合物7对A549细胞凋亡具有浓度和时间依赖性的效果。详见附图5，附图6。

本发明与现有技术相比较其有益效果：

在本发明中，所获紫草宁苯甲酰丙烯酸羧酸酯类衍生物与紫草宁相比，均具有明显的肿瘤细胞抑制活性，部分新颖化合物对肿瘤细胞株的抑制活性明显优于其母体分子紫草宁，并且毒副作用低。同时化合物7对A549细胞增殖的抑制最为明显。本研究拟通过激光共聚焦及western blot手段对药物作用机制进行深入探究。

四：附图说明

图1表示化合物1-15及紫草宁对MCF-7细胞增殖的抑制

图2表示化合物1-15及紫草宁对HeLa细胞增殖的抑制

图3表示化合物1-15及紫草宁对H460细胞增殖的抑制