[发明专利]一种重组人内皮抑素融合蛋白及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种Her2纳米抗体二聚体与一种重组人内皮抑素构成融合蛋白及其制备方法和应用，重组人内皮抑素融合蛋白包括Her2纳米抗体二聚体和重组人内皮抑素蛋白，该融合蛋白易于纯化，能特异性靶向Her2高表达的乳腺癌细胞，并具有较好的穿膜效果，能有效抑制肿瘤细胞生长；本发明公开了重组人内皮抑素融合蛋白可应用于制备临床上靶向检测或治疗乳腺癌的药物，可提高药物在肿瘤病变部位的浓度，相应提高了量效比；本发明还公开了重组人内皮抑素融合蛋白的编码基因的重组表达载体、转基因细胞系或转基因重组菌，以及基因工程制备方法，以应用于融合蛋白的临床生产制备。

技术领域

本发明属于医药生物技术领域，具体涉及一种重组人内皮抑素融合蛋白及其制备方法和应用。

背景技术

肿瘤需要功能性的血管网络提供氧气、养料并清除代谢产物。肿瘤除了通过与宿主血管融合而获得部分血管外，还必须通过形成新生血管网构建自己的血管系统，这样才能持续地生长和发展。如果没有血管系统提供氧气和养料，实体瘤的增长不会超过1mm³。实体肿瘤的生长和转移依赖于新生血管生成的学说的提出，为肿瘤治疗开辟了一个新的途径。

1997年，哈佛大学O’Reilly等发现小鼠血管内皮瘤(EOMA)细胞系的培养液能够抑制血管内皮细胞的增殖。通过分离纯化得到一种新的蛋白质，命名为鼠的Endostatin，后来翻译成血管内皮抑制素(简称内皮抑素)。内皮抑素是由细胞外基质成分胶原XⅧ的羧基末端水解而来的一种动物体内天然存在的蛋白，是一种内源性血管形成抑制因子，能有效地抑制机体内病理性血管的形成，具有广谱的抗肿瘤作用。关于人血管内皮抑制素(ES)，在临床研究中发现，Down’s综合症病人的ES表达水平较高，实体瘤发病率很低；癌症患者血清中ES的含量有利于总生存时间的延长。体外研究发现，ES特异性地抑制微血管内皮细胞的增殖、迁移、粘附和存活，能有效地抑制鸡胚尿囊膜(CAM)新生血管的形成，而实验性动物研究也证实ES有显著的抗肿瘤作用。目前发现ES可以和内皮细胞(ECs)表面多个非特异性受体结合，抑制ECs在血管形成中的作用。人血管内皮抑制素同样具有抑制肿瘤的作用，因此，关于人内皮抑素的研究也越来越多。