[发明专利]一种正相液相色谱-串联质谱法检测口含烟中烟碱旋光异构体的方法

权利要求书

1.一种正相液相色谱-串联质谱法检测口含烟中烟碱旋光异构体的方法，其特征在于：首先对口含烟中的烟碱进行提取，采用手性色谱柱实现烟碱旋光异构体的分离，柱后高压输液泵引入异丙醇并进行分流，结合串联质谱进行分析测定，具体步骤如下：

a、口含烟中烟碱的萃取：

首先对口含烟进行预处理，称取处理后的口含烟样品0.1~0.5g，加入1~5 mL 5.0%NaOH溶液，静置5~30 min，准确加入含有内标的正己烷溶液10~50 mL，超声萃取5~30 min，取上层清液过有机相滤膜，有机相滤膜上加有1~3.0 g无水硫酸钠，净化后的样品溶液进正相液相色谱-串联质谱分析；

b、样品的分析：

液相色谱条件：采用正相液相色谱-串联质谱分析，所用色谱柱为手性色谱柱；柱温：30 ^oC；流动相A：含有碱性添加剂的正己烷，流动相B：异丙醇；等度洗脱；流速0.5~1.0 mL/min；进样体积10 μL，分析时间为17 min；

柱后加入异丙醇及分流：在柱后通过三通阀连接，采用安捷伦高压输液泵引入异丙醇，控制异丙醇流速，同时，采用离子源上配置的三通阀进行柱后分流，通过控制PEEK管的长度，控制分流比；

离子源：电喷雾电离源（ESI）；扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应监测MRM；电喷雾电压：5000 V；气帘气压力：30 psi；辅助气1压力：70 psi；辅助气2压力：70 psi；离子源温度：550 ^oC。

2.根据权利要求1所述的检测口含烟中烟碱旋光异构体的方法，其特征在于：所述口含烟包括以下类型口含烟：袋装口含烟、含化型口含烟、胶基型口含烟；所述口含烟预处理方式如下：袋装口含烟直接剪碎，含化型口含烟碾磨成粉，胶基型口含烟碾成片状并剪碎。

3.根据权利要求1所述的检测口含烟中烟碱旋光异构体的方法，其特征在于：步骤a中，采用外消旋的d₃-烟碱为内标，d₃-S-(-)-烟碱和d₃-R-(+)-烟碱合并计算，浓度范围为1~10 mg/mL。

4.根据权利要求1所述的检测口含烟中烟碱旋光异构体的方法，其特征在于：步骤b中，所述的手性色谱柱为大赛璐手性色谱柱CHIRALPAK^® IC，规格为4.6 mm×250 mm，i.d. 5 µm。

5.根据权利要求1所述的检测口含烟中烟碱旋光异构体的方法，其特征在于：所述碱性流动相添加剂为二乙胺，添加量为正己烷质量的0.02%~0.2%。

6.根据权利要求1所述的检测口含烟中烟碱旋光异构体的方法，其特征在于：所述的等度洗脱条件为A: B = 95：5。

7.根据权利要求1所述的检测口含烟中烟碱旋光异构体的方法，其特征在于：柱后加入异丙醇流速为0.1~1.0 mL/min。

8.根据权利要求1所述的检测口含烟中烟碱旋光异构体的方法，其特征在于：柱后分流比例为1:3~1:5。