[发明专利]一种测定肝微粒体中芍药苷代谢产物的方法

权利要求书

1.一种测定肝微粒体中芍药苷代谢产物的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)肝微粒体中芍药苷代谢产物的获得：在培养瓶中，于Tris-HCl缓冲溶液中，加入肝微粒体、NADP、NADH、G-6-P、G-6-P DH和MgCl₂，混合均匀，在37℃全温振荡器中温孵5min后，加入芍药苷的Tris-HCl缓冲溶液，得温孵体系；温孵1-3h，温孵过程中，每20min在液面上通O₂半分钟，反应后，将培养瓶从振荡器中取出，迅速加入甲醇终止代谢反应，得芍药苷代谢产物；所述的温孵体系中：肝微粒体浓度为2.0mg/mL，NADP浓度为1.0mmol/L，NADH浓度为0.5mmol/L，G-6-P浓度为10.0mmol/L，G-6-P DH浓度为1.0IU/mL，Mg²⁺浓度为4.0mmol/L，芍药苷浓度为0.1mg/mL；

2)样品处理：将芍药苷代谢产物涡旋振荡30s，转速5000r/min下离心10min，吸取上清液，旋转蒸干，加入甲醇振荡复溶，再次离心，吸取上清液，在氮气下吹干后，残留物用甲醇复溶，过0.22μm微孔滤膜，进高效液相色谱检测；

3)样品测定：芍药苷代谢产物的检测，具体条件如下：

色谱条件：色谱柱：Diamonsil^TM ODS C₁₈

流速：0.2mL/min

柱温：30℃

进样量：1μL

检测波长：230nm

流动相：A:水+1％的甲酸，B:乙腈+1％的甲酸，采用梯度洗脱，程序如下：

质谱条件：

一级质谱：电离模式：电喷雾电离(ESI)

扫描模式：负离子扫描

毛细管电压：2.8kV

锥孔电压：3.0V

源温度：110℃

脱溶剂温度：300℃

脱溶剂气体流量：500L/Hr

二级质谱：电离模式：电喷雾电离(ESI)

扫描模式：负离子扫描

碰撞气：氮气

毛细管电压：2.8kV

锥孔电压：3.0V

源温度：110℃

脱溶剂温度：300℃

脱溶剂气体流量：500L/Hr

碰撞能量：15-35eV。

2.根据权利要求1所述的一种测定肝微粒体中芍药苷代谢产物的方法，其特征在于：所述肝微粒体为小鼠、大鼠、狗、兔或人的肝微粒体。

3.根据权利要求1所述的一种测定肝微粒体中芍药苷代谢产物的方法，其特征在于：Tris-HCl缓冲溶液的浓度为0.05mol/L，pH 7.4。

4.根据权利要求1所述的一种测定肝微粒体中芍药苷代谢产物的方法，其特征在于：步骤3)中，所述的色谱柱，型号为Diamonsil^TM ODS C₁₈，100mm×2.1mm，1.8μm。