[发明专利]一种凝油剂及其制备方法

权利要求书

1.一种凝油剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)介孔二氧化硅的制备：通过水热合成法制备得到介孔二氧化硅；

(2)介孔二氧化硅的改性：称取一定量的贻贝足底蛋白替代物多巴胺，将多巴胺加入到量取好的磷酸缓冲液中，待多巴胺充分溶解后，迅速加入步骤(1)中的介孔二氧化硅，搅拌，离心，加入等量的磷酸缓冲液洗涤，加热干燥，得改性后的介孔氧化硅；

(3)固定化脂肪酶的制备：将步骤(2)中改性后的介孔二氧化硅，完全溶于磷酸缓冲液中，加入脂肪酶，搅拌后得混合液，离心，倒掉上清液，再加入等量的磷酸缓冲液，充分震荡，再离心，倒掉上清液，重复2-3次，最后，取出沉淀物于蒸发皿内，置于常温下干燥，得到固定化脂肪酶。

(4)凝油剂粗品的制备：将步骤(3)所得的固定化脂肪酶、赤藓糖醇、月桂酸乙烯酯、丙酮加入到反应容器中反应，待反应完全后，离心去除固定化脂肪酶，然后过滤，得到含有凝油剂的液体，蒸馏分离溶剂丙酮，得凝油剂粗品；

(5)凝油剂的分离纯化：利用硅胶闪式层析法分离纯化，得凝油剂；

所述凝油剂为

2.根据权利要求1所述的凝油剂的制备方法，其特征在于所述步骤(1)的介孔二氧化硅为有序的介孔二氧化硅或洋葱状介孔二氧化硅。

3.根据权利要求1所述的凝油剂的制备方法，其特征在于所述步骤(2)和步骤(3)中的磷酸缓冲溶液为100mM的磷酸缓冲溶液， pH7 .0。

4.根据权利要求1所述的凝油剂的制备方法，其特征在于所述步骤(2)中的多巴胺与磷酸缓冲溶液的重量体积比g/ml为1:2000～2:1000；所述步骤(2)中的多巴胺与介孔二氧化硅的重量比为1:10～4:10；所述步骤(2)中的搅拌时间为2～4h；所述步骤(2)中的干燥温度为35～45℃。

5.根据权利要求1所述的凝油剂的制备方法，其特征在于所述步骤(3)中的改性后的介孔二氧化硅与磷酸缓冲溶液的重量体积比g/ml为4:500～6:500；所述步骤(3)中的改性后的介孔二氧化硅与脂肪酶的重量比为1:1。

6.根据权利要求1所述的凝油剂的制备方法，其特征在于所述步骤(3)中的脂肪酶为真菌脂肪酶。

7.根据权利要求1所述的凝油剂的制备方法，其特征在于所述步骤(4)中固定化脂肪酶、赤藓糖醇、月桂酸乙烯酯的重量比为45:55:153；所述步骤(4)中的赤藓糖醇与丙酮的重量体积比g/ml为55：4000；所述步骤(4)中的反应时间为45～54h；所述步骤(4)和(5)中的离心转速为7000rpm。

8.根据权利要求1所述的凝油剂的制备方法，其特征在于所述步骤(4)中的蒸馏温度为58℃；所述步骤(5)中的硅胶粒的孔径为54-75μm；所述步骤(5)中的洗脱剂为三氯甲烷：甲醇＝26:1～三氯甲烷：甲醇＝29:1；所述步骤(5)中的展开剂为三氯甲烷:甲醇＝9:1。

9.根据权利要求4所述的凝油剂的制备方法，其特征在于所述步骤(2)中的多巴胺与磷酸缓冲溶液的重量体积比g/ml为1:1000；所述步骤(2)中的多巴胺与介孔二氧化硅的重量比为2:10；所述步骤(2)中的搅拌时间为3h；所述步骤(2)中的干燥温度为40℃。

10.根据权利要求5所述的凝油剂的制备方法，其特征在于所述步骤(3)中的改性后的介孔二氧化硅与磷酸缓冲溶液的重量体积比g/ml为1:100。

11.根据权利要求6所述的凝油剂的制备方法，其特征在于所述步骤(3)中的脂肪酶为柱状假丝酵母脂肪酶(Candida Cylindrace Lipase), 假丝酵母脂肪酶(Candida RugosaLipase), 白地霉脂肪酶(Geotrichum Candium Lipase), 根瘤菌脂肪酶(RhizomucorMiehei Lipase)。