[发明专利]一种利用正常小鼠建立HER2阳性肿瘤的动物模型的方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体是一种利用正常小鼠建立HER2阳性肿瘤的动物模型的方法。

背景技术

恶性肿瘤是威胁人类生命健康的主要疾病之一，传统的癌症治疗手段如手术治疗、放射治疗、药物治疗均具有一定局限性。由于靶向性较差，放射治疗和药物治疗易损伤正常人体细胞，产生不良反应。随着对肿瘤发生、发展的分子机制的深入研究和生物技术的快速发展，生物治疗已经成为肿瘤治疗的第四种模式。多肽肿瘤疫苗是由来自肿瘤细胞特异性抗原、病毒相关抗原、癌基因或者抑癌基因突变蛋白的多肽组成的疫苗，在细胞因子、趋化因子等佐剂的辅助下，能激活或者加强机体自身抗肿瘤免疫，进而杀伤和清除肿瘤细胞。与传统疫苗相比，多肽肿瘤疫苗具有易于合成纯化、安全性高、特异性强等优点，因此多肽肿瘤疫苗是肿瘤疫苗研究方向的热点。

人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2，HER2)，是由原癌基因HER2/neu编码的185kD的蛋白质，属于表皮生长因子受体家族，是结合在细胞膜表面的受体酪氨酸激酶，参与导致细胞生长和分化的信号传导途径。HER2基因是影响肿瘤预后的重要因素，很多类型的肿瘤细胞中均发现了HER2/neu的过表达，HER2过表达的患者，肿瘤预后差，复发率高。因此HER2是肿瘤治疗的理想靶标。目前已有多个以HER2为靶点的治疗药物(包括小分子化药和单抗药物)上市，并取得良好的治疗效果。

同时，合成HER2/neu的肿瘤相关抗原上的表位多肽，作为肿瘤疫苗，接种机体产生针对HER2的特异性细胞毒性T淋巴细胞，对肿瘤细胞进行杀伤，是肿瘤治疗的另一个重要的研究方向。目前国外已有数个针对HER2的多肽疫苗进入或完成二期临床试验阶段，一个进入三期临床试验阶段。相关临床试验结果表明，多肽疫苗能够刺激诱导人体CD4+T和CD8+T淋巴细胞，显著增加两者在体内的含量水平，并对肿瘤细胞进行杀伤。

然而，对于肿瘤疫苗，其在动物体内的效力评价是比较困难的。其难点在于，缺少能够用于效力评价的理想的动物模型。目前现有的几种动物模型均有其局限性，难以真正用于肿瘤疫苗的效力评价：①传统的用于评价抗肿瘤药物效力的免疫缺陷动物(裸鼠或SCID鼠)，由于免疫系统缺陷，完全不能用于肿瘤疫苗的效力评价，因为肿瘤疫苗正是通过激活机体免疫系统而达到抗肿瘤的作用；②正常小鼠因为免疫排斥的原因，很难成功接种人源肿瘤细胞，即使经过药物免疫抑制，可以接种人源肿瘤细胞，但免疫抑制的小鼠也不适于评价肿瘤疫苗的效力；③免疫重建小鼠虽可在免疫缺陷动物中重建免疫系统，但操作繁琐，稳定性不佳，且动物容易因免疫排斥而死亡；④转基因小鼠，是目前最适合用于肿瘤疫苗药效评价的动物模型，但费用昂贵，限制了其使用。因此需要一种操作方便、经济实用的建立用于评价肿瘤疫苗效果的动物模型的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种利用正常小鼠建立HER2阳性肿瘤的动物模型的方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种利用正常小鼠建立HER2阳性肿瘤的动物模型的方法，包括以下步骤：

(1)细胞培养：将人胃癌细胞NCI-N87在细胞培养基中培养，收集处于对数生长期的细胞；

(2)接种：将人胃癌细胞NCI-N87接种正常小鼠；

(3)评价：接种2周后，肿瘤直径≥0.6cm并且成瘤率≥80％，表明成功建立HER2阳性肿瘤的动物模型；

其中所述方法不包括对正常小鼠进行免疫抑制的步骤。

作为本发明进一步的方案：所述HER2阳性肿瘤是胃癌肿瘤。

作为本发明进一步的方案：所述步骤(2)中，人胃癌细胞NCI-N87以1.25×10⁵-1×10⁶个/只的浓度范围接种正常小鼠。

作为本发明进一步的方案：人胃癌细胞NCI-N87以5×10⁵个/只的浓度接种正常小鼠。

作为本发明进一步的方案：所述正常小鼠是免疫功能正常的小鼠。

作为本发明进一步的方案：所述免疫功能正常的小鼠是Balb/c小鼠。

本发明还提供一种用于非诊断目的的检测HER2阳性肿瘤疫苗的治疗效力的方法，包括以下步骤：

(1)建立模型：将HER2阳性的人胃癌细胞NCI-N87以5×10⁵个/只接种正常小鼠，建立移植瘤动物模型；