[发明专利]抗番茄青枯病复合微生物菌剂的生产工艺

说明书

技术领域

本发明属于肥料加工技术领域，具体涉及一种抗番茄青枯病复合微生物菌剂的生产工艺。

背景技术

番茄，即西红柿(学名：Lycopersiconesculentum Mill.)，是茄科番茄属一年生或多年生草本植物，体高0.6-2米，全体生粘质腺毛，有强烈气味，茎易倒伏，叶羽状复叶或羽状深裂，花序总梗长2-5厘米，常3-7朵花，花萼辐状，花冠辐状，浆果扁球状或近球状，肉质而多汁液，种子黄色，花果期夏秋季，番茄是我国家常蔬菜的一种，日常种植量很大。番茄青枯病是由细菌引起的，是细菌性维管束组织病害。叶片表现为，初始顶部新叶萎蔫下垂，后下部叶片发展产生凋萎，接下来才是中部叶片产生凋萎，发病后叶片色泽较淡，呈青枯状。发病初始期植株叶片白天出现萎蔫，傍晚后恢复正常，后很快扩展至整株萎蔫，并不再恢复而死亡；茎表现为，初期为水渍状斑点扩大后呈褐色，病茎下部表皮粗糙，常产生不定根，剖开病茎，维管束变褐色，横切后用于挤压可见乳白色粘液渗出。茄科雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)是引起番茄青枯病的主要病菌，现在，植物青枯病已经成为世界范围内的传播广泛、危害严重的重大病害之一。目前，针对番茄青枯病的防治手段主要是提高番茄的抗性，实现耕作控制、药剂防治和生物防治等，但由于青枯菌长期存活性和寄主范围多样性，导致至今尚无有效的化学农药和其他防治办法，因此青枯病被称为植物的“癌症”。

化学药剂防治青枯病虽然能起到一定的作用，但是长期大量施用化学药剂容易造成环境污染和番茄的药剂残留，严重影响人体健康。生物防治由于其对环境、生态和人畜的安全性而受到了国内外研究者的广泛关注，其主要是通过施用拮抗菌、有机肥或生物有机肥等措施调节土壤微生态、改善土壤微生物多样性、抑制病原菌的生长或提高植物自身抗性，从而抑制土传病害的发生。

壳寡糖是由甲壳素脱乙酰基后经过酶解而得到的低聚糖，可作为植物生长调节剂，增强植物对虫害的防御能力，已有研究表明壳寡糖对番茄花叶病毒病有诱抗效果。

防治番茄青枯病具有一定的历史，如专利申请号 201610767916.9一种预防西红柿青枯病的生物有机肥及其制备方法，采用芽孢杆菌类和霉菌及荧光假单胞菌类添加至有机肥料中，制成生物有机肥来预防番茄青枯病；再如申请号201210004589.3 一种番茄青枯病拮抗菌及其应用公开的16srRNA具有SEQ ID No.1 基因序列的蜡状芽孢杆菌，菌株较为单一；又如申请号 200910183360.9防除连作番茄青枯病的拮抗菌及其微生物有机肥料，公开了一株解淀粉芽孢杆菌生产的抗番茄青枯病的生物有机肥料，亦存在菌株单一的问题。以上专利除将拮抗菌添加至肥料当中复配外，并无添加壳寡糖这一能提高番茄抵抗力的有益成分，并且未经粘涂等生产处理，不能达到长效抗病的效果，本发明则能很好地解决这一问题。本发明利用微生物对青枯病菌的拮抗、杀灭作用及壳寡糖对番茄诱导抗性达到对此病的防治，具有无污染、环境友好、成本低廉、效果持久的优点。

发明内容

本发明的目的在于提供抗番茄青枯病复合微生物菌剂的生产工艺。

本发明的目的是通过如下措施来达到的：

a)胶状芽孢杆菌菌体制备：购买菌种，制备菌种培养基，配方为蛋白胨1％，牛肉膏0.3％，氯化钠0.5％，pH7.5,121℃灭菌30min, 接入购买菌种，摇床100～150r/min培养24h，此为菌种液；制备扩增培养基，配方为牛肉膏0.4％、酵母浸出粉0.9％、氯化钠 0.3％,pH7.5，转入发酵罐进行高温灭菌，灭菌后待温度降低至36℃时，接入5％菌种液，转速100～150r/min培养24～26h，转出发酵液4000r/min离心30min，获得胶状芽孢杆菌菌体；

b)哈茨木霉菌制备：购买菌种，制备菌种培养基，配方为无琼脂PDA培养基，25℃接入购买菌种，摇床100～150r/min培养 144h，此为菌种液；制备扩增培养基，配方为蔗糖2％、硝酸铵0.5％、磷酸钠0.2％、硫酸镁0.1％，pH9.0，转入发酵罐进行高温灭菌，灭菌后待温度降低至25℃时，接入5％菌种，转速100～150r/min 培养144～192h，转出发酵液4000r/min离心30min，获得哈茨木霉菌菌体；