[发明专利]嵌合蜘蛛丝及其用途

权利要求书

1.一种编码嵌合蜘蛛丝多肽的核酸，其中所述嵌合蜘蛛丝多肽在N-末端到C-末端方向上包括：

(a)家蚕丝丝心蛋白重链(fhc)多肽的N-末端结构域(NTD)；

(b)一个或更多个重复片段，所述一个或更多个重复片段包括一个或更多个蜘蛛丝基序，

其中每个重复片段包括一个或更多个拷贝的弹性基序，所述一个或更多个拷贝的弹性基序在线性N-末端到C-末端方向上共价连接到一个或更多个强度基序；以及

(c)家蚕丝fhc多肽的C-末端结构域(CTD)；

其中所述弹性基序包括一个或更多个鞭状样(Flag-样)基序、大腺丝蛋白样(MaSp-样)基序或小腺丝蛋白样(MiSp-样)基序；并且

其中所述一个或更多个MaSp-样基序包括一个或更多个MaSp1基序或MaSp2基序；

其中所述鞭状样弹性基序是选自由SEQ ID NO 27-29组成的组的一致序列中的重复氨基酸基序；

其中所述MaSp-样弹性基序是选自由SEQ ID NO 18-23组成的组的一致序列中的重复氨基酸基序；并且

所述MiSp-样弹性基序是选自由SEQ NO 24-26组成的组的一致序列中的重复氨基酸基序。

2.如权利要求1所述的核酸，其中包括一个或更多个蜘蛛丝基序的所述一个或更多个重复片段包括

14至42个蜘蛛丝基序的重复片段，

每个重复片段包括4至16个拷贝的弹性基序(E)，所述4至16个拷贝的弹性基序(E)在线性N-末端到C-末端方向上共价连接到包括强度基序(S)的序列。

3.如权利要求1或2所述的核酸，其中所述嵌合蜘蛛丝多肽还包括一个或更多个接头。

4.如权利要求1或2所述的核酸，其中所述嵌合蜘蛛丝多肽还在所述弹性基序和所述强度基序之间包括一个或更多个接头。

5.如权利要求2-4中任一项所述的核酸，其中所述弹性基序为GPGGA(SEQ ID NO:2)并且所述强度基序为GGPSGPGSAAAAAAAA(SEQ ID NO:3)。

6.如权利要求1-5中任一项所述的核酸，其中所述编码嵌合蜘蛛丝多肽的核酸

在其5’端的侧翼为包括家蚕丝丝心蛋白重链(fhc)基因的主启动子、上游增强子元件(UEE)、以及基础启动子的核酸，并且

在其3’端的侧翼为包括家蚕丝丝心蛋白重链(fhc)基因的转录终止位点和聚腺苷酸化位点的核酸。

7.一种核酸，所述核酸在5’到3’方向上包括以下序列：

(a)包括转座子的第一末端重复的序列；

(b)第一调控序列，所述第一调控序列包括家蚕丝丝心蛋白重链(fhc)基因的主启动子、上游增强子元件(UEE)、以及基础启动子，其中所述启动子可操作地连接到编码嵌合蜘蛛丝多肽的核酸序列；

(c)所述编码嵌合蜘蛛丝多肽的核酸序列，其中所述嵌合蜘蛛丝多肽在N-末端到C-末端方向上包括：

(i)家蚕丝丝心蛋白重链(fhc)多肽的N-末端结构域(NTD)；

(ii)14至42个蜘蛛丝基序的重复片段，每个重复片段包括4至16个拷贝的弹性基序(E)，所述4至16个拷贝的弹性基序(E)在线性N-末端到C-末端的方向上共价连接到包括强度基序(S)的序列；

其中所述弹性基序(E)为GPGGA(SEQ ID NO:2)；并且所述强度基序(S)为GGPSGPGSAAAAAAAA(SEQ ID NO:3)；和

(iii)家蚕丝fhc多肽的C-末端结构域(CTD)；

(d)第二调控序列，所述第二调控序列包括家蚕丝丝心蛋白重链(fhc)基因的转录终止位点和聚腺苷酸化位点；以及

(e)包括转座子的第二末端重复的序列；

其中至少一个所述启动子在转化的家蚕细胞或组织中是有活性的；

其中至少一个所述末端重复促进序列(b)、(c)和(d)转座到转化的家蚕的基因组中。

8.如权利要求7所述的核酸，其中所述嵌合蜘蛛丝多肽还包括一个或更多个接头。

9.如权利要求7所述的核酸，其中所述嵌合蜘蛛丝多肽还在所述弹性基序和所述强度基序之间包括一个或更多个接头。

10.如权利要求1-9中任一项所述的核酸，其中所述核酸编码功能相似的嵌合蜘蛛丝多肽，其中所述多肽还包括一个或更多个保守氨基酸置换、插入或删除。