[发明专利]一种丹参花粉离体萌发培养基及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种丹参花粉离体萌发培养基及其应用。

背景技术

丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge)为唇形科鼠尾草属多年生草本植物，主产于四川、山东、河南、陕西等省，其干燥根和根茎为著名中药材，具有祛瘀止痛、养血安神、活血通经等功效，主要用于心脑血管、冠心病、肝硬化及妇科病的治疗，是药用植物理想的模式植物。

近年来，随着丹参及其衍生产品临床需求的增加，使得国内药材市场对丹参原药材的需求也迅速增加，丹参种植面积逐年扩大，但是由于丹参栽培长期单一采用无性繁殖方式，导致各地普遍存在品种退化、产量低、感染病虫害等严重问题。因此，开展丹参优良品种的选育极为必要。

花粉是植物有性繁殖过程中遗传物质传递的载体，也是研究杂交育种的关键。研究丹参花粉的离体萌发条件，对测定丹参花粉活力、促进川丹参花粉体外贮藏、种质资源保存与创新、杂交育种、高产优质栽培等具有重要的理论和实际意义。

目前的研究多集中在丹参开花授粉的生物学特性、花粉诱导再生等方面，未见关于丹参花粉离体萌发的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种丹参花粉离体萌发培养基及其应用。

本发明提供了一种丹参花粉离体萌发培养基，所述培养基为：以BK培养基为基本培养基，添加终浓度为125～200g/L的碳源、0.1～0.2g/L的硼酸。

其中，所述碳源为蔗糖。

其中，所述培养基为：以BK培养基为基本培养基，添加终浓度为125g/L的蔗糖、0.2g/L的硼酸。

本发明还提供了一种丹参花粉离体萌发培养方法，步骤如下：

采集丹参花蕾的花粉，置于上述的培养基中，培养48h，即可。

其中，所述培养的温度为25℃。

其中，所述丹参为山东丹参或川丹参。

本发明还提供了一种测定丹参花粉活力的方法，步骤如下：

a、采集花粉：盛花期，于早上9：00-10：00取丹参花蕾的花粉，置于干燥的培养皿中；

b、花粉离体萌发：将步骤a的花粉置于上述培养基中，培养48h；

c、花粉活力测定：取步骤b培养后的培养基，放置于载玻片上，在显微镜下观察，计算花粉萌发率。

其中，步骤b中，培养的温度为25℃。

本发明还提供了上述培养基在丹参花粉离体萌发中的应用。

本发明还提供了上述培养基在丹参花粉活力测定中的应用。

一般认为，花粉离体培养时，花粉萌发率越高，说明培养条件越适宜花粉萌发，越能够客观的反应花粉的发育状况和实际活力，用于体外花粉活力测定越准确；而且可得到大量具有生活力的花粉管，可以广泛的应用于相关科研实验中。

本发明提供花粉离体萌发培养基，在离体培养花粉48h后，可使丹参花粉具有较高的萌发率。利用本发明提供的培养基，测定丹参花粉活力准确可靠，为丹参花粉活力测定提供了一种稳定有效的方法，在此基础上，可以筛选出活力较高的丹参花粉，为丹参花粉体外保存、人工授粉、杂交育种及不育机制研究提供了理论依据。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

附图说明

图1培养温度对花粉萌发率的影响

具体实施方式

下面以实施例作进一步说明，但本发明不局限于这些实施例。

实施例1本发明培养基的制备

1、BK培养基的制备：

在水溶液中加入质量分数为10％的H₃BO₄，30％的Ca(NO₃)₂，20％的Mg SO₄和10％的KNO₃，得到BK培养基。

2、制备本发明培养基

将蔗糖、硼酸加入BK培养基，使其浓度分别为125g/L、0.2g/L。

实施例2本发明培养基的筛选

1、实验材料