[发明专利]高F值寡肽粗液分离纯化方法

权利要求书

1.高F值寡肽粗液分离纯化方法，其特征在于以下步骤：

1）预处理：将带鱼去头、去皮、去内脏，用清水冲洗干净，剪成小块，在去腥液中浸泡去腥，脱脂；

2）酶解：采用胃蛋白酶和风味蛋白酶双步酶解，过滤得到高F值寡肽粗液；

3）超滤：将步骤2得到的酶解液超滤，得到滤过液；

4）活性炭脱芳：在滤过液中加入活性炭，搅拌，离心，将上清液冷冻干燥得到寡肽粉末；

5）凝胶层析：将凝胶置于蒸馏水中浸泡，充分溶胀后倒入抽滤瓶，抽真空，装柱，平衡，将寡肽粉末溶于蒸馏水，上样，用超纯水洗脱，检测吸光度值，按峰合并，冷冻干燥；

6）HPLC纯化：采用液相色谱仪，乙腈和超纯水为洗脱液进行梯度洗脱，收集洗脱液，冷冻干燥。

2.根据权利要求1所述的高F值寡肽粗液分离纯化方法，其特征在于：所述的步骤3中超滤膜规格为4.5~5.5kDa。

3.根据权利要求1所述的高F值寡肽粗液分离纯化方法，其特征在于：所述的步骤4中活性炭是以优质椰子壳为原料制成的粉状活性炭，活性炭和滤过液固液比为1:18~23，pH为5.5~6.5，温度为22~26℃，吸附时间为2.5~3.2h。

4.根据权利要求1所述的高F值寡肽粗液分离纯化方法，其特征在于：所述的步骤4中活性炭掺杂0.2~0.45%纳米氧化铝和0.1~0.3%纳米氧化铁。

5.根据权利要求1所述的高F值寡肽粗液分离纯化方法，其特征在于：所述的步骤5中凝胶采用SepHadex G-25，浸泡温度为50~65℃，浸泡时间为5~6.5h。

6.根据权利要求1所述的高F值寡肽粗液分离纯化方法，其特征在于：所述的步骤5中倒入抽滤瓶，抽真空期间不断地换水并去掉漂浮在表面的杂质、吸掉凝胶颗粒中的气泡，直至凝胶沉淀后上清液清澈透明、未见任何悬浮物。

7.根据权利要求1所述的高F值寡肽粗液分离纯化方法，其特征在于：所述的步骤5中寡肽粉末：蒸馏水质量体积比为18mg：1mL~22mg：1mL，充分溶解后过0.42~0.48μm 针筒式滤膜。

8.根据权利要求1所述的高F值寡肽粗液分离纯化方法，其特征在于：所述的步骤5中洗脱液为超纯水，流速为0.54~0.65 mL/min，每1.8~2.2min收集1管。

9.根据权利要求1所述的高F值寡肽粗液分离纯化方法，其特征在于：所述的步骤6中采用梯度洗脱，洗脱时间、洗脱液成份及其百分比和流速依次为：0~5min，乙腈15%，超纯水85%，流速为0.45~0.52 mL/min；5~15min，乙腈40%，超纯水60%，流速为0.45~0.52 mL/min；15~25min，乙腈80%，超纯水20%，流速为0.45~0.52 mL/min；25~30min，乙腈100%，流速为0.55~0.62 mL/min；30~40min，乙腈40%，超纯水60%，流速为0.55~0.62 mL/min；40~50min，乙腈20%，超纯水80%，流速为0.55~0.62 mL/min。

10.根据权利要求1所述的高F值寡肽粗液分离纯化方法，其特征在于：所述的高F值寡肽粗液中含有氨基酸序列为SCASVCKA的高F值寡肽。