[发明专利]用于石油降解的醋酸钙不动杆菌及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种用于石油降解的醋酸钙不动杆菌，其特征在于，该用于石油降解的醋酸钙不动杆菌的名称为：醋酸钙不动杆菌JH250-8，拉丁名：Acinetobacter baumannii JH250-8，保藏编号为:CGMCC No.8902；保藏日期：2014年03月07日；保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号；保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC。

2.根据权利要求1所述的一种用于石油降解的醋酸钙不动杆菌，其特征在于，所述用于石油降解的醋酸钙不动杆菌其16S rDNA序列如SEQ ID No.1所示。

3.根据权利要求1所述的一种用于石油降解的醋酸钙不动杆菌，其特征在于，所述用于石油降解的醋酸钙不动杆菌，可分解烷烃类化合物，包括十二烷、十三烷、十四烷、十五烷、十六烷、十七烷、十八烷、十九烷、二十烷、二十一烷、二十二烷、二十三烷、二十四烷、二十五烷、二十六烷、二十七烷、二十八烷、二十九烷。

4.根据权利要求1所述的一种用于石油降解的醋酸钙不动杆菌，其特征在于，所述用于石油降解的醋酸钙不动杆菌在仅含原油的培养基中，3天内可将含油量为0.6％的原油培养基中90％以上烷烃分解。

5.根据权利要求1所述的一种用于石油降解的醋酸钙不动杆菌，其特征在于，所述用于石油降解的醋酸钙不动杆菌，在正常代谢过程中能合成甘油、棕榈酸、硬脂酸作为代谢产物，且三种代谢产物均能分泌到细胞外；其中甘油、棕榈酸在胞外的浓度高于胞内，硬脂酸胞内外浓度相近；胞内棕榈酸与硬脂酸的含量相当，胞外的棕榈酸含量高于硬脂酸；其代谢产物中并未检测到额外的脂肪酸，说明该菌株可能将烷烃转化为脂肪酸后随即被菌体利用，并没有发生有机酸的累积。

6.根据权利要求1所述的一种用于石油降解的醋酸钙不动杆菌，其特征在于，所述用于石油降解的醋酸钙不动杆菌分解土壤中原油的方法为：取以25％甘油为保护剂于-80℃冻藏的JH250-8菌种，在LB固体培养基上划线，于30℃培养箱中活化菌株，选择分离良好，较大的菌落，加入5ml LB培养基中，于30℃，180rpm摇床培养10h，按1％接种量转接入100ml LB培养基中，于30℃，180rpm摇床培养10h，按1％接种量转接入2L原油培养基中,于30℃，180rpm摇床培养2d；用LB培养基调节菌浓度OD₆₀₀＝0.5，投放于石油污染土壤中，自然条件下降解石油，降解时间30d；降解效果检测：采用重量法，取石油被降解后的土壤，沸程：30-60℃石油醚提取其中石油组分，于50℃水浴上蒸去石油醚，称量残油重量，与对照组相比，计算石油降解率。

7.一种用于石油降解的醋酸钙不动杆菌的制备方法，在含原油的土壤环境中筛选出来的天然菌株经过12次原油培养基的传代培养后，30℃划线培养，取单菌落，继续划线分离培养，反复4次，最后一次取单菌落，于LB培养基中液体培养至OD₆₀₀约0.5-0.6，加入等体积50％甘油，混合均匀后，分装，-80℃保存区菌种；取5只保存的菌种，送中国微生物菌种保藏管理中心，申请菌种保藏。

8.权利要求1-6任一所述用于石油降解的醋酸钙不动杆菌在修复环境原油污染方面的应用。