[发明专利]一种甘草素的分离纯化方法

说明书

本发明涉及药物提取技术领域，公开了一种甘草素的分离纯化方法。本发明所述方法向甘草原料中加入1.4‑二氧六环和一号溶剂的混合溶剂或1.4‑二氧六环回流提取，过滤后，浓缩得甘草素富集液，加入二号溶剂，结晶，得甘草素粗品；接着将甘草素粗品加三号溶剂至完全溶解，然后加入四号溶重结晶过滤，获得甘草素。本发明以1.4‑二氧六环和其他适宜溶剂组成分离纯化甘草素的溶剂体系，通过简单有效的溶剂提取工艺实现了较高纯度和收率的甘草素制备过程，整个方法对设备及试剂要求低，所用试剂常见易得，设备简单，工艺容易实现标准化、自动化，可以实现产业化生产。

技术领域

本发明涉及药物提取技术领域，具体涉及一种甘草素的分离纯化方法。

背景技术

甘草素是从甘草中提取的一种二氢黄酮单体化合物，其在甘草中的含量为0.4％左右，其结构式为：

甘草素作为甘草黄酮的一种，研究表明具有多种功效：(1)罗康和谢思柔研究表明甘草素能有效抑制人肝癌SMMC-7721细胞以及人宫颈癌Hela细胞的增殖,并能通过PI3K/Akt信号通路抑制人肺癌A549细胞的体外迁移能力，同时甘草素能抑制黑色素瘤在C57BL/6小鼠体内的侵袭转移,其机制可能是甘草素通过阻碍PI3K/Akt/NF-KB通路,降低肿瘤中MMP2/9的蛋白表达水平。(2)刘宪光采用体外培养人舌癌Cal-27细胞,用不同浓度的甘草素作用不同时间表明甘草素能够明显抑制人舌癌Cal-27细胞的增殖,并能够诱导细胞凋亡,并且呈现浓度和时间依赖性,有一定的剂量-效应关系。(3)Shigeo T研究表明甘草素不仅有抗溃疡作用而且有显著的抑制单胺氧化酶从而可治疗抑郁性精神病。(4)日本的奥田拓男教授和宫本宽治助教授研究发现甘草素是甘草中对艾滋病病毒(HIV)增殖有抑制作用的三种化学黄酮成分之一，其作用是甘草甜素的25倍。1989年日本学者申请关于甘草中黄酮类化合物治疗艾滋病(AIDS)的专利中指出甘草素具有治疗艾滋病的作用。(5)Zou Kun和FuNaiwu表明甘草素有抗氧、抗过敏、抗霉菌、防止皮肤老化、有效清除超氧离子等作用。(6)此外王建新在《天然活性化妆品》一书中指出甘草素还是良好的美白化妆品原料，能较好的抑制酪氨酸酶活性，0.01μmol/L的甘草素即可抑制黑色素的形成，在美白化妆品中用量为1％。目前在医药技术领域，甘草素作为不同形式制剂在抗肿瘤，治疗肺炎、肝病等方面申请了多次发明专利并实际应用。

目前，甘草素提取纯化报道较少：(1)王建国等人将粉碎的甘草用甲醇浸提两天，依次用石油醚、苯、乙酸乙酯萃取，再经过聚酰胺柱层析、硅胶柱层析和乙醇-水的重结晶等步骤得到甘草素。(2)牛犇等人把粉碎的甘草用95％的乙醇萃取，再分别用石油醚、乙酸乙酯三次萃取，再用用乙酸乙醋一石油醚(1:7)洗脱，最终得到甘草素。(3)李国钟采用超临界萃取法萃取甘草素，研发结果显示，不同萃取体系对甘草素取率的影响。只用CO₂溶剂，不用夹带剂时，不可萃取出甘草素；使用CO₂-H₂O体系，可以萃取出甘草素；若使用CO₂-H₂O-C₂H₅OH萃取体系，则萃取率明显提高，且随着乙醇浓度的增大，甘草素的萃取率增大，温度及固液比均对甘草素萃取率有一定的影响。

综上所述几种制备甘草素的方法，为分离纯化甘草素提供了很好的借鉴。但现存技术存在耗时长，生产成本高，步骤繁琐，产品纯度不高，未对原材料进行充分有效利用，无法大规模生产等缺点。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种甘草素的分离纯化方法，使得本发明能够以简便易行的工序从甘草原料中获得高收率和高纯度的甘草素。

本发明的另外一个目的在于提供一种甘草素的分离纯化方法，使得甘草素粗品仅需一次重结晶即能够达到大于98％的高纯度的成品。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种甘草素的分离纯化方法，包括：