[发明专利]含人干细胞因子的皮肤修复液及其制备方法

权利要求书

1.含人干细胞因子的皮肤修复液在制备促进糖尿病皮肤创伤修复的药物中的用途，其特征在于，由以下质量分数的组分组成：人干细胞因子1.0×10^-3～0.1％、稳定剂1～5％、莎梵婷40～80％、聚乙二醇4005～20％和水余量；所述稳定剂由以下浓度的组分组成：人胎盘间充质干细胞碎片0.5～3mg/mL、牛磺酸2～6mg/mL和α-酮戊二酸1×10^-3～5×10^-3mol/L；所述人胎盘间充质干细胞碎片由以下步骤制得：

S1、胎盘标本处理：取健康母体胎盘，检验检疫合格后，将胎盘组织进行组织消化，得细胞悬液；

S2、不连续Percoll梯度密度分离：在50mL离心管中逐层铺入7个密度的Percoll分离液，每个密度5mL，再缓缓加入5mL细胞悬液，使用水平离心机室温下1200g离心20min，小心弃除离心管20mL刻度以上的液体，收集12.5～20.0mL刻度的细胞层和12.5～7.5mL刻度的液体，分别放入不同离心管里，用D-Hank’s液稀释5倍后，室温下1000g离心15min，

S3、纯化：用含体积分数为10％胎牛血清(FBS)的DMEM/F12、丙酮酸盐、10毫克/升亚硒酸钠胰岛素、2毫克/升乙醇胺和20毫微克/mL的bFGF配制成悬浮液，将密度梯度离心后的滋养细胞进行重悬，用差速贴壁法去除成纤维细胞后计数；

S4、传代与鉴定：将上述滋养细胞接种于加入含有体积分数15％FBS的DMEM/F12培养液，放置于37℃、体积分数5％的CO₂饱和湿度培养箱内培养，每3d补加新鲜培养液，按1×10⁴cell/cm²传代培养，培养液换为体积分数10％FBS的DMEM/F12培养基，细胞代数记为P1代，待细胞达到70～90％融合后，消化，按1×10⁴cell/cm²传代培养，细胞代数记为P2代，收集P2代细胞，通过流式细胞仪鉴定，鉴定符合要求后使用D-Hank′s平衡盐溶液洗涤细胞，离心粉碎，即得。

2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述皮肤修复液由以下质量分数的组分组成：人干细胞因子3.0×10^-3～0.08％、稳定剂2～5％、莎梵婷50～80％、聚乙二醇4005～10％和水余量。

3.如权利要求2所述的用途，其特征在于，所述稳定剂由以下浓度的组分组成：人胎盘间充质干细胞碎片1～2mg/mL、牛磺酸2～4mg/mL和α-酮戊二酸2×10^-3～5×10^-3mol/L。

4.如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述稳定剂由以下浓度的组分组成：人胎盘间充质干细胞碎片1.5mg/mL、牛磺酸3.5mg/mL和α-酮戊二酸3.5×10^-3mol/L。

5.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的皮肤修复液为液体制剂。

6.如权利要求1～5任一所述的用途，其特征在于，所述皮肤修复液的制备方法包括以下步骤：

将聚乙二醇400和莎梵婷混合均匀后，加入稳定剂，涡旋混匀后，加入人干细胞因子水溶液，不断涡旋使其形成均一稳定的溶液，即得。