[发明专利]一种应用于PCR或RT-PCR的改良的缓冲体系及应用

说明书

本发明公开了一种应用于PCR或RT‑PCR的改良的缓冲体系，所述改良的缓冲体系为3‑(N‑吗啉)丙磺酸、Tris和柠檬酸三钠相互混合而成，所述溶液状态为碱性；所述3‑(N‑吗啉)丙磺酸：Tris：柠檬酸三钠的摩尔比为20‑100：10‑50：1‑5，所述改良的缓冲体系的pH为8.3‑9。本发明的缓冲稳定性更强，扩增效率更高，检测灵敏度及精密度好。

技术领域

本发明涉及分子检测领域，提供了一种应用于PCR或RT-PCR的改良的缓冲体系及应用。

背景技术

目前，PCR技术广泛的应用于生物，医疗，食品等领域。提供一个稳定的PCR或RT-PCR缓冲体系是PCR过程中各种酶高效进行的关键因素。Tris-HCl缓冲体系是最经典的PCR工作反应体系，保障PCR工作中pH的稳定性等功能。但Tris-HCl缓冲液是一种双极化的离子缓冲液，pKa为8.3(20℃)，△pKa为0.021/℃，相对温度较敏感，随着温度的升高pH降低。在典型的热循环条件下，当延伸温度在72℃时，真正的pH值在6.8-7.8之间，在pH小于7.5以下，缓冲能力极差。对许多热启动酶而言，pH变化导致酶活性下降甚至失活，影响PCR或RT-PCR的检测灵敏度及精密度。

为了对现有技术进行改进，人们进行了长期的探索，提出了各种各样的解决方案。例如，中国专利文献公开了一种高GC含量基因的PCR扩增缓冲液[申请号：CN 105861491A]，本发明公开了一种高GC含量基因的PCR扩增缓冲液。所述高GC含量基因的PCR扩增缓冲液包括如下组分：Tris-Hcl 150mmol/L、(NH₄)₂SO₄ 40mmol/L、一水甜菜碱2.6mol/L、乳化剂Tween 20 0.02％、PCR反应增强剂20％，配置后，过滤去菌，-20℃保存。本发明还公开一种基于高GC含量基因的PCR扩增缓冲液的扩增方法及应用。本发明使用了(NH₄)₂SO₄替代了KCL，以增加引物与模板结合的特异性，并能兼容更广谱的Mg2+范围。

上述方案虽然在一定程度上解决了现有技术的不足，但是整体设计还不够合理。目前，仍缺乏一种检测灵敏度好的改良的PCR或RT-PCR缓冲体系及应用。

发明内容

本发明的目的是针对上述问题，提供了一种检测灵敏度好的应用于PCR或RT-PCR的改良的缓冲体系及应用。

为达到上述目的，本发明采用了下列技术方案：本发明的一种应用于PCR或RT-PCR的改良的缓冲体系，所述改良的缓冲体系为3-(N-吗啉)丙磺酸、Tris和柠檬酸三钠相互混合而成；所述3-(N-吗啉)丙磺酸：Tris：柠檬酸三钠的摩尔比为20-100：10-50：1-5。

进一步地，所述溶液状态为碱性。

进一步地，所述改良的缓冲体系的pH为8.3-9。

更进一步地，所述改良的缓冲体系的pH为8.8。

本发明所述的应用于PCR或RT-PCR的改良的缓冲体系在PCR或RT-PCR的检测中的应用。

本发明所述的应用于PCR或RT-PCR的改良的缓冲体系在病原体的DNA或RNA的扩增实验中的应用。

进一步地，所述病原体为乙型肝炎病毒HBV、人类免疫缺陷病毒HIV或结核杆菌TB中的任意一种。

有益效果：本发明的缓冲稳定性更强，扩增效率更高，检测灵敏度及精密度好。

与现有技术相比，本发明具有如下优点：