[发明专利]一种流式分选活性细胞的精准涂片方法

说明书

本发明公开了一种流式分选活性细胞的精准涂片方法，包括：将收集管设置在流式细胞仪输出包含有活性细胞的分选液流的下方；在收集管的底部添加第一缓冲液；调整流式细胞仪输出包含有活性细胞的分选液流所喷射方向的位置和/或收集管的位置，使分选液流恰好射入收集管的底部的第一缓冲液中；在流式细胞仪上选择待分选的活性细胞，并输出包含有活性细胞的分选液流，使包含有活性细胞的分选液流输出至收集管的底部；将收集管设置在离心涂片机上，并通过离心涂片机将活性细胞精准涂到载玻片上。通过上述方式，本发明的涂片方法将流式细胞仪和离心涂片机的结合，能够精准地把活性细胞特别是单个活性细胞直接涂到载玻片上且不丢失，方便后续形态观察。

技术领域

本发明涉及生物学和医学技术领域，尤其是涉及一种流式分选活性细胞特别是单细胞的精准涂片方法。

背景技术

生物样本包含细胞，细胞之间均有差异性，将活性细胞逐一分离出来进行研究，有助于了解生物样本的多样性。

对含量稀少的细胞(低至百万分之一，甚至更低)，比如肿瘤患者外周血中的循环肿瘤细胞、肿瘤患者体内积液中的肿瘤细胞、孕妇外周血中的胎儿有核红细胞，可取得的目的细胞极少，并且这些生物样本的时效性强，样本具有不可复制性，快速精准的活性细胞分离和分析对疾病的及时诊断或产前诊断尤为重要,活性细胞图像分析是重要的技术手段之一。

流式细胞仪用于检测液流中的细胞特性，即流式细胞仪的显著特征为快速分析细胞的多个特性，并根据细胞的特性高效精准分选目的细胞。也就是说，流式细胞仪能将复杂样本中单个活性细胞快速精准地直接分选至载玻片上，但含细胞的液滴迅速干燥，形成盐结晶，导致细胞膜破裂，无法看到完整的细胞。又或者在载玻片上滴等渗液体，将活性细胞分选到等渗液体中，然后盖上盖玻片使细胞在等渗液体中保存较长时间，但盖玻片覆盖的过程，会造成细胞流失，并且这种情况下，无法对细胞进行染色处理，等渗液体干燥后，同样形成盐结晶，导致细胞破裂。这两种情况均破坏或影响了细胞的形态，无法进行完整的图像分析。

也就是说，现有的各种技术均无法精准地把活性细胞特别是单细胞放到载玻片上，且容易丢失，不便于形态观察。

发明内容

本发明主要解决的技术问题是提供一种流式分选活性细胞的精准涂片方法，解决了现有技术中无法精准地把活性细胞特别是单细胞放到载玻片上的技术问题。

为解决上述技术问题，本发明采用的一个技术方案是：提供一种流式分选活性细胞的精准涂片方法，包括：将收集管设置在流式细胞仪输出包含有活性细胞的分选液流的下方；在收集管的底部添加第一缓冲液；调整流式细胞仪输出包含有活性细胞的分选液流所喷射方向的位置和/或收集管的位置，使分选液流恰好射入收集管的底部的第一缓冲液中；在流式细胞仪上选择待分选的活性细胞，并输出包含有活性细胞的分选液流，使包含有活性细胞的分选液流输出至收集管的底部；将收集管设置在离心涂片机上，并通过离心涂片机将活性细胞精准涂到载玻片上。

其中，输出包含有活性细胞的分选液流的步骤之后，且在将收集管设置在离心涂片机上的步骤之前，该方法还包括：在收集管底部的第一缓冲液上再添加第二缓冲液，以通过第二缓冲液覆盖在包含有分选液流的第一缓冲液上。

其中，在收集管的底部添加第一缓冲液的步骤包括：在收集管的底部添加包括有蛋白质的第一缓冲液。

其中，在收集管底部的第一缓冲液上再添加第二缓冲液的步骤包括：在收集管底部的第一缓冲液上再添加包括有蛋白质的第二缓冲液。

其中，收集管包括第一管体和与第一管体连通的第二管体，其中第一管体和第二管体的连接呈L型状设置，且第一管体设置在流式细胞仪用于输出包含有活性细胞的分选液流的输出口的下方。