[发明专利]猪凝血酶的制备方法及其生产系统

权利要求书

1.权利要求1所述的猪凝血酶制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤a)新鲜猪血制备成抗凝血浆，经阴离子交换凝胶初提，首次洗脱，得凝血酶原溶液；

步骤b)步骤a所得凝血酶原溶液加入氯化钙和卵磷脂激活，浓缩得初级凝血酶溶液；

步骤c)将步骤b所得初级凝血酶溶液进行S/D病毒灭活，得初级S/D凝血酶溶液；

步骤d)将步骤c所得初级S/D凝血酶溶液用CM葡聚糖阳离子交换凝胶吸附纯化，再次洗脱，浓缩得浓缩凝血酶溶液；

步骤e)将步骤d所得浓缩凝血酶溶液进行除病毒过滤，得凝血酶溶液。

2.权利要求1所述的猪凝血酶制备方法，其特征在于，步骤a)中抗凝血浆的制备过程包括：

步骤a1)室温下将新鲜猪血加入盛有抗凝剂的容器，搅拌均匀后转运；

步骤a2)将步骤a1)所得猪血离心分离，收取抗凝血浆，过滤备用。

3.权利要求2所述的猪凝血酶制备方法，其特征在于，步骤a还包括：

步骤a3)将步骤a2)所得抗凝血浆用DEAE葡聚糖阴离子交换凝胶吸附凝血酶原，所得阴离子交换凝胶采用盐溶液初洗至不显血色，再加入洗脱液进行首次洗脱，过滤即得凝血酶原溶液。

4.权利要求3所述的猪凝血酶制备方法，其特征在于，盐溶液为0.9％氯化钠溶液。

5.权利要求3所述的猪凝血酶制备方法，其特征在于，步骤b包括：

步骤b1)向步骤a3)所得凝血酶原溶液中加入CaCl₂·2H₂O和卵磷脂激活，得到含凝血酶的激活液；

步骤b2)将步骤b1)所得含凝血酶的激活液进行超滤浓缩脱盐，得初级凝血酶溶液。

6.权利要求1所述的猪凝血酶制备方法，其特征在于，步骤c的具体操作为：将步骤b所得初级凝血酶溶液顺次经不同规格滤膜过滤，向滤液中投入聚山梨酯80和磷酸三丁酯，聚山梨酯80与初级凝血酶溶液的重量比为1∶100，磷酸三丁酯与初级凝血酶溶液的重量比为0.3∶100，搅拌，得初级S/D凝血酶溶液。

7.权利要求6所述的猪凝血酶制备方法，其特征在于：步骤c中顺次过滤时滤膜孔径逐渐减小。

8.权利要求6所述的猪凝血酶制备方法，其特征在于，步骤d包括：

步骤d1)将步骤c2所得初级S/D凝血酶溶液用CM葡聚糖阳离子交换凝胶吸附，所得阳离子交换凝胶用缓冲盐溶液初洗后再用洗脱液进行洗脱，得纯化凝血酶溶液；

步骤d2)将步骤d1所得纯化凝血酶溶液进行超滤浓缩脱盐，得浓缩凝血酶溶液。

9.权利要求1所述的猪凝血酶制备方法，其特征在于：卵磷脂的浓度为0.03～0.15％，氯化钙(CaCl₂·2H₂O)用量为1.5～3g/L洗脱液，激活时间为10～40min。

10.猪凝血酶生产系统，其特征在于：包括顺次连通的血液分离区、阴离子交换区、激活液反应池、病毒灭活区、阳离子交换区和病毒过滤区；其中，激活液反应池配有两个带计量阀的加料装置，两个加料装置分别装有氯化钙和卵磷脂，阳离子交换区内设有CM葡聚糖阳离子交换凝胶。