[发明专利]北极海洋红球菌B7740产类异戊二烯的结构鉴定方法

说明书

本发明公开了北极海洋红球菌B7740产类异戊二烯的结构鉴定方法，该方法采用液质联用法对北极海洋红球菌B7740产类异戊二烯进行初步鉴定。该方法操作方便快捷，结果可靠、稳定，可初步鉴定出红球菌B7740产类异戊二烯物质中包含9种类胡萝卜素和14种类异戊二烯醌。

技术领域

本发明属于红球菌B7740产类异戊二烯分析的技术领域，具体涉及北极海洋红球菌B7740产类异戊二烯的结构鉴定方法。

背景技术

红球菌属是一类广泛分布于自然界的革兰氏阳性菌，在土壤、海底沉积物和食草动物粪便中含量丰富，且多数为营腐生生活。红球菌属(Rhodococcus sp.)是在1891年由Zoof建立的，从建立至今，分类地位一直不确定。目前，红球菌归属于放线菌门(Actinobacteria)，放线菌纲(Actinobacteria)，放线菌亚纲(Actinobacteridae)，放线菌目(Actinomycetales)，棒杆菌亚目(Croynebacterineae)，诺卡氏菌科(Nocardiaceae)，红球菌属(Rhodococcus)。

目前，国内外对红平红球菌的研究较多，主要集中在其生物降解能力研究和分子学研究，而对红球菌产类异戊二烯物质研究较少，尤其对极地海洋来源的红球菌所产类异戊二烯物质的鉴定与研究尚十分匮乏，红球菌B7740是我国北极科考队于第三次北极科考时从B77站点20米的表层海水中发现，对于该菌所产物质的研究与传统类异戊二烯物质的鉴定有所不同。常见高等植物来源的类胡萝卜素按照含氧和不含氧分为两类，作为动植物生长必需的色素，目前已鉴定出来的约有750种，其中来自于海洋的约有250种，40种出现在人类膳食之中。红球菌B7740所产类胡萝卜素因该微生物独特的代谢通路，与常见高等植物来源类胡萝卜素相比，结构相差较大，结构种类不单一，其独特的结构不仅赋予了它独特的活性，也增大了鉴定其分子结构的难度。

发明内容

为解决上述现有技术存在的问题，本发明提供了北极海洋红球菌B7740产类异戊二烯的结构鉴定方法，该鉴定方法操作方便快捷，结果可靠、稳定。

实现本发明上述目的所采用的技术方案为：

北极海洋红球菌B7740产类异戊二烯的结构鉴定方法，采用液质联用法对北极海洋红球菌B7740产类异戊二烯进行初步鉴定。

北极海洋红球菌B7740产类异戊二烯的结构鉴定方法，包括如下步骤：

1、类异戊二烯待测样品的配制：

将类异戊二烯提取液加入8-10wt％的氯化钠溶液中，类异戊二烯提取液与氯化钠溶液的体积比为1:1，混合均匀，得混合液，将混合液在3-8℃离心分层，取下层有色层，将有色层干燥，再用甲醇与甲基叔丁基醚体积比为1:1的混合溶剂复溶，并用微孔滤膜过滤，得到类异戊二烯待测样品；

2、类异戊二烯待测样品的检测：

采用液质联用仪对类异戊二烯待测样品进行检测：

2.1、液相色谱条件：

色谱柱YMCC30，柱温25℃，紫外吸收检测器，检测波长450nm和242nm；

流动相：流动相A为甲醇，流动相B为甲基叔丁基醚，流速：1ml/min；

洗脱程序：

第一阶段：采用流动相A和流动相B的混合液洗脱30分钟，其中流动相A的体积百分含量由95％变为70％，流动相B的体积百分含量由5％变为30％；

第二阶段：采用流动相A和流动相B的混合液洗脱20分钟，其中流动相A的体积百分含量由70％变为50％，流动相B的体积百分含量由30％变为50％；