[发明专利]染井吉野樱的组培快繁方法

权利要求书

1.染井吉野樱组培快繁方法，其特征在于，所述方法以染井吉野樱半木质化单芽茎段或经扦插繁殖萌发的小芽为外植体，经过外植体处理和消毒、芽初代诱导培养、增殖壮苗培养、生根培养、炼苗及移栽步骤建立染井吉野樱组织培养快繁体系；

所述外植体处理和消毒步骤包括：

A、选取健壮染井吉野樱植株半木质化单芽茎段作为外植体，先用洗衣粉水浸泡20-30min，再轻轻清洗外植体表面，将其表面的尘土和部分菌体去除，然后用流动的自来水冲洗2-4h后置于超净工作台中；在鼓风状态下于超净工作台上先用质量分数70-75％乙醇消毒8-15s后用无菌水清洗3-6次，再用质量分数0.1％升汞溶液消毒8-15min后用无菌水洗4-6次，最后用无菌纱布或无菌滤纸吸干外植体表面水珠后转接到芽初代诱导培养基中培养；或

B、于冬末春初在壮龄树上选择一年生、生长健壮、生活力旺盛的发育枝条，剪有饱满芽的木质化或半木质化枝条作为插穗，插穗长度为10-15厘米，有2-3个芽；温室高架苗床下铺电加热设施，上铺10cm厚的基质珍珠岩，扦插之前基质及插穗都用1000ppm浓度的多菌灵或福尔马林溶液消毒；插好之后采用电加热促进土壤升温至22-25℃从而加快插穗发芽，同时10天后对穗条用500ppm浓度的多菌灵溶液进行喷雾消毒，减少有害微生物到最低状态；待20天新芽长到5-7cm时，切取未木质化的单芽茎段或顶芽作为外植体按A步骤进行常规消毒后置于超净工作台中；在鼓风状态下在超净工作台上先用70-75％酒精消毒3s后，用无菌水清洗3-6次，再用0.1％升汞溶液消毒8min后用无菌水洗4-6次，最后用无菌纱布或无菌滤纸吸干外植体表面水珠后转接到芽诱导培养基中培养；

所述芽初代诱导培养步骤为：

将经过外植体处理和消毒处理后的染井吉野樱单芽茎段或顶芽切成1.5-2.5cm小段并接种到芽初代诱导培养基中，即MS+BA0.5-1.0mg/L+NAA0.02mg/L+TDZ2.0-3.0mg/L+蔗糖20-30g/L+琼脂5.5-6.5g/L芽初代诱导培养基中，先在22-25℃条件下全暗培养5-7天，然后置于每天光照10-12小时，光照强度2000lx的培养室中培养，25天左右继代一次，直至诱导形成丛生芽；

所述增殖壮苗培养步骤为：

将经过芽初代诱导培养获得的丛生芽分切成芽块至增殖壮苗培养基上进行继代培养，所述增殖壮苗培养基为1/2MS+BA0.5-0.8mg/L+NAA0.05-0.08mg/L，接种后置于每天光照10-12小时，光照强度为2000lx，培养温度22-25℃的条件下培养，多次反复切割进行继代培养，得到健壮丛生芽；

所述生根培养步骤为：

将增殖壮苗培养获得的高度为2.5-3.5cm的健壮芽分切接种到生根培养基上进行生根培养，所述生根培养基为1/2MS+NAA0.01-0.02mg/L，接种后先在22-25℃条件下暗培养0-5天，然后置于光照10-12小时，光照强度2000lx，培养温度为22-25℃的培养室中培养30-35天即可出瓶。

2.根据权利要求1所述的染井吉野樱组培快繁方法，其特征在于，所述炼苗及移栽步骤为：

将经生根培养后获得的高3.5-5.5cm、生长健壮、根系粗壮、叶色浓绿的生根试管苗去盖置于培养室光下炼苗3-5天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，并用800-1000ppm多菌灵浸泡10min后栽入由泥炭土：珍珠岩＝7：3混合并用1000ppm多菌灵进行喷淋过的基质中；放于温室培养，栽后前5-10天精心管护，每天至少分5次给幼苗喷雾浇水，保持叶面湿度，移栽成活率达80％以上；待幼苗成活后再移栽大田。