[发明专利]特异性抑制MSI-1基因表达的siRNA及其重组载体和应用

说明书

本发明公开了一种特异性抑制MSI‑1基因表达的siRNA及其重组载体和应用，属于分子生物学与生物医药技术领域。所述siRNA，包括正义链和反义链，正义链：5’‑AAUUUCACACACUUUCUCCAC‑3’；反义链：5’‑GGAGAAAGUGUGUGAAAUUCA‑3’。本发明提供的siRNA可以特异性、高效地抑制MSI‑1基因的mRNA和蛋白表达，减少细胞增殖，增加细胞凋亡，降低细胞迁移和侵袭能力，并能有效逆转卵巢癌细胞对紫杉醇的耐药。本发明还提供了所述siRNA及其重组载体在制备治疗卵巢癌、神经胶质瘤、结直肠癌、子宫内膜癌、或逆转卵巢癌耐药的药物中的应用。

技术领域

本发明涉及分子生物学与生物医药技术领域，具体为一种特异性抑制MSI-1基因表达的siRNA及其重组载体和应用。

背景技术

RNA干扰(RNA interference，RNAi)，又叫基因沉默，是动植物中广泛存在的序列特异性转录后基因沉默机制。2001年Tuschl和他同事发现体外培养的哺乳动物细胞转染人工合成的21-23nt的双链siRNA分子可以模拟RNAi作用，进一步研究发现短于21bp或者长于25bp的双链RNA(dsRNA)均不能有效启动RNAi，而且其中间序列只要有一个碱基的错配，基因沉默的效应就明显减退甚至消失，充分体现了其作用的特异性。

正因为RNAi作用具有很高的特异性和高效性，为基因的功能研究提供了强有力的研究工具，利用小分子干扰RNA(siRNA)作为基因沉默的方法被广泛用于恶性肿瘤机制的研究，大力推动了以该技术为基础的肿瘤特异高效治疗策略的研发进程。

卵巢癌是女性第二大常见恶性肿瘤，是女性因癌致死的主要原因，在早期很少有症状表现，60％以上的妇女在明确诊断时已是III期或IV期，已发生广泛转移，预后很差。标准的治疗手段为卵巢肿瘤细胞减灭术加后续化疗，但大多数的患者还是会因为化疗耐药、肿瘤复发最终死亡，五年生存率极低(30％左右)。如何改善卵巢癌的治疗效果、寻找卵巢癌化疗耐药的解决方案，是妇科肿瘤学家面临的最严峻挑战。

分子靶向药物和化疗联合应用是目前提高恶性肿瘤患者生存率最有前景的治疗方法。研究发现肿瘤细胞中的一类亚群，肿瘤干细胞样细胞(Cancer stem-like cells，CSCs)，能导致肿瘤形成和药物耐药，CSCs的抗药性和一些关键基因的表达有明显相关性。在卵巢癌细胞中也陆续发现了一些CSCs标记分子和耐药相关，musashi-1(MSI-1)基因就是其中一个。最近有文献报道在卵巢浆液性腺癌、粘液性腺癌和透明细胞癌中MSI-1蛋白表达明显高于正常组织，临床资料分析发现还和预后密切相关，MSI-1高表达预后就差。

MSI-1是在研究神经元前体细胞不对称分裂过程中首次被发现和报道的一种RNA结合调控基因，是一个干细胞早期调控的重要基因，在小鼠小肠和人结肠憩室干细胞中也有表达。最近发现干细胞标记分子MSI-1在实体肿瘤，如神经胶质瘤、结直肠癌和子宫内膜癌中表达均有上调，同时MSI-1可以作为疾病进展、转移和预后的判断指标。进一步研究发现MSI-1可能通过抑制Numb基因表达进而激活了Notch信号传导途径。MSI-1不仅是细胞干细胞的标记，还是肿瘤细胞化疗和放疗耐药的信号传导分子。这些途径可能是MSI-1基因参与卵巢癌发病和耐药的主要机制。

因此，采用RNAi技术进行MSI-1基因在卵巢癌中的研究将是对卵巢癌发病机制的重要补充，是对卵巢癌及其耐药治疗的重要探索和应用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种特异性抑制MSI-1基因表达的siRNA，用于卵巢癌发病机制研究。本发明的另一个目的在于提供该siRNA在制备治疗卵巢癌和紫杉醇耐药的卵巢癌药物中的应用。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明设计、合成3对特异性抑制MSI-1基因表达的siRNA，分别转染到卵巢癌细胞株A2780及其紫杉醇耐药株A2780/taxol中，结果发现S2抑制MSI-1基因表达的干扰效果最明显。