[发明专利]一种食品中合成着色剂的色谱测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及合成着色剂检测技术领域，具体是一种食品中合成着色剂的色谱测定方法。

背景技术

追求外观的美是人的天性，人们对吃的食品也需要装扮。五彩的糖果、诱人的蛋糕、鲜红的糖葫芦，莫不让人垂涎三尺。其实所有这些缤纷多彩的颜色都离不开色素。天然食品在加工保存过程中容易退色或变色，所以人们在加工食品的过程中常添加色素。

色素可以分为天然色素和人工色素，天然色素主要由植物组织中提取，也包括来自动物和微生物的色素，由于天然色素的不稳定性和价格昂贵，食品工业大多使用人工合成色素。

合成色素主要以炼焦油中分离出来的苯胺染料为原料制成，所以统称为炼焦色素或苯胺色素，具有致泻性、致突性（基因突变）、致癌作用，在GB2760标准中对其使用有严格的剂量限制 ，因此准确快速检测合成色素尤其重要。

目前，合成色素的检测方法为GB/T5009.35,虽为2016所修定，但该标准有以下缺陷：一、使用聚酰胺粉吸附，操作繁杂耗费试剂人工强度大；二、由于赤藓红的苯甲酸钠结构不能被聚酰胺粉吸附，因此不能把赤藓红和其他色素一起提取净化，赤藓红不能同步测定，需要用液液萃取后再上机检测；三、最低检出限为0.2～0.5mg/kg，检出浓度高，灵敏度低；四、由于使用聚酰胺粉吸附，样品要逐一提取净化，不适合批量样品检测。五、该标准方法未制定火腿肠、粉肠、香肠等高脂肪的样品检测步骤。

发明内容

本发明的目的在于提供一种食品中合成着色剂的色谱测定方法，该方法能够从食品中一次性提取柠檬黄、苋菜红、酸性靛蓝、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝和赤藓红八种合成着色剂，同步高效地进行液相色谱测定。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种食品中合成着色剂的色谱测定方法，包括以下步骤：

S1、样品提取

称取2g食品样品至离心管中，a）对于液体食品样品，加入乙酸锌溶液和草酸钾/磷酸氢二钾溶液，沉淀蛋白质，再用10%氨水调pH至6，然后用水定容至10 mL，离心处理，得到待净化的样品上清液；b）对于配制酒类样品，加热除去乙醇，用氨水溶液调pH至6，然后用水定容至10 mL，离心处理，得到待净化的样品上清液；c）对于固体食品样品，均质后用氨化甲醇溶液重复提取至提取液无色，合并提取液于60℃水浴蒸发，用水定容至10 mL，离心处理，得到待净化的样品上清液；d）对于肉类样品，均质后石油醚脱脂，再用氨化甲醇溶液重复提取至提取液无色，合并提取液于60℃水浴蒸发，用水定容至10 mL，离心处理，得到待净化的样品上清液；

S2、样品净化

取5 mL步骤S1得到的样品上清液，以1 mL/min的速度通过弱阴离子固相萃取柱，再分别用6 mL pH4水溶液、6 mL pH6水溶液以及6 mL甲醇淋洗弱阴离子固相萃取柱，然后将弱阴离子固相萃取柱通入空气吹干；之后用6 mL氨化甲醇洗脱并收集，60℃水浴氮气吹干，再加1 mL水复溶，混匀，上清液为样品溶液，供液相色谱分析；

S3、配置人工着色剂混合标准应用液

准确移取适量0.5 mg/mL柠檬黄标准储备液、0.5 mg/mL苋菜红标准储备液、0.5 mg/mL胭脂红标准储备液、0.5 mg/mL日落黄标准储备液、1.0 mg/mL诱惑红标准储备液、0.5 mg/mL亮蓝标准储备液、1.0 mg/mL赤藓红标准储备液以及0.5 mg/mL酸性靛蓝标准储备液，并用水配制成0.2 µg/mL、0.5 µg/mL、2.0 µg/mL、5.0 µg/mL、10 µg/mL和20 µg/mL的系列人工着色剂混合标准应用液；

S4、将步骤S3配置的人工着色剂混合标准应用液注入液相色谱仪测定，液相色谱测定条件为：色谱柱：C18，4.6 × 250 mm，5 μm；流动相：A为乙酸铵溶液，B为甲醇；流速：1.0 mL/min；柱温：30℃；进样量：20 µL；梯度洗脱程序：0.0～5.0min，80%A～65%A和20～35%B；5.0～12.0min，65%A～20%A和35～80%B；12.0～16.0min， 20%A和80%B；16.0～17.0min， 20%A～80%A和80～20%B；17.0～20.0min， 80%A和20%B；检测波长：柠檬黄428mm、苋菜红521mm、酸性靛蓝608mm、胭脂红509 mm、日落黄483 mm、诱惑红507 mm、亮蓝625 mm以及赤藓红529 mm；得到八种人工合成着色剂的液相色谱图和峰面积，绘制标准系列的线性方程；