[发明专利]一种淀粉样多肽的纯化方法

说明书

技术领域

本发明涉及多肽技术领域，尤其涉及淀粉样多肽的纯化方法。

背景技术

阿尔茨海默病(Alzheimer disease，AD)，即俗称的老年性痴呆，是一种中枢神经系统变性病，起病隐袭，病程呈慢性进行性，是老年期痴呆最常见的一种类型。主要表现为渐进性记忆障碍、认知功能障碍、人格改变及语言障碍等神经精神症状，严重影响社交、职业与生活功能。AD的病因及发病机制尚未阐明，目前比较公认的为淀粉样蛋白级联学说，该学说认为AD患者可能是由于淀粉样蛋白前体基因和早老素基因等的突变，导致Aβ((β-淀粉样蛋白)异常分泌和产生过多导致大量Aβ在脑组织内沉积，对周围的突触和神经元具有毒性作用，可破坏突触膜，最终引起神经细胞死亡。Aβ沉积导致AD的其他病理变化，是AD发病的核心环节。减少Aβ的形成，抑制Aβ的沉积，是预防和治疗AD的根本途径。因此，如何预防Aβ的聚合以及得到Aβ较高纯度的单体具有十分重大的作用，对阿尔茨海默病多肽(Peptide)的预防和治疗可以做出重要的贡献。

淀粉样多肽纯化比较困难，是由于多肽本身的性质决定的，在室温下就很容易聚合。目前对淀粉样多肽的制备方法报道很少，一般对Aβ加热溶解，采用高效液相制备，但该方法无可避免的会导致在纯化过程中Aβ已经聚合。纯化冻干的Aβ还需要解聚处理。过程比较繁琐，成本消耗较高。而且在纯化过程中有可能导致样品在制备柱中扩散，导致峰型较宽，分离效果差，得率偏低。

有鉴于上述的缺陷，本设计人，积极加以研究创新，以期创设一种淀粉样多肽的纯化方法，使其更具有产业上的利用价值。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明的目的是提供一种克服现有生产工艺的不足、解决了淀粉样多肽在纯化过程中容易聚合的问题的淀粉样多肽的纯化方法。

本发明的淀粉样多肽的纯化方法，包括淀粉样多肽的溶解、反相色谱柱分析和反相制备色谱柱吸附及洗脱收集的步骤。

进一步的，所述溶解的步骤包括将淀粉样多肽溶于溶剂中得到淀粉样多肽溶液。

当作为反相色谱柱分析的梯度检测时，溶解后得到的淀粉样多肽溶液过滤后进行粗品分析检测。

当作为反相制备色谱柱吸附及洗脱收集时，溶解后得到的淀粉样多肽溶液用水稀释到合适的比例，进行进样吸附并洗脱收集。

进一步的，所述反相色谱柱分析的步骤包括将所述淀粉样多肽溶液接反相色谱分析柱进行梯度检测，得到分析图谱。

反相梯度检测分析条件为：

流动相：A液：0.05％-0.2％三氟乙酸的水溶液；B液：乙腈；

分析柱：Kromasil 100-5C18-MS 5um 4.6*250mm；

时间：0-20min；

流速：1mL/min；

A：B为：95-99：1-5到1-5：95-99；

波长：200-240nm。

进一步的，所述反相制备色谱柱吸附及洗脱收集包括以下步骤：

(1)根据所述分析图谱设置制备色谱柱的制备梯度。

(2)将淀粉样多肽溶液接制备色谱柱进行进样吸附并洗脱收集。

(3)收集洗脱出来的所有峰进行质谱确认及产品纯度检测。

反相制备条件为：

流动相：A液0.05％-0.2％三氟乙酸的水溶液，B液异丙醇；

时间：0-25min；

流速：20.00mL/min；

A：B为：95-65：5-35到5-35：65-95；

波长：200-240nm。

产品纯度检测条件为：

色谱柱为C18柱，柱子型号为Innoval ODS-2 5μm 4.6*250mm，

流动相：A液：浓度为0.1-0.2％三氟乙酸水溶液，B液：乙腈；

时间：0-20min；

流速：1.00mL/min；

A：B为：90-70：10-30到10-30：70-90；

波长：200-240nm；

进样量：20μL。

进一步的，所述淀粉样多肽为Aβ1-42、Aβ1-40、Aβ42-1以及淀粉样多肽Aβ1-42的衍生物，并分别具有如下的氨基酸序列：

人源Aβ1-42的氨基酸序列为：

DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVVIA；

鼠源Aβ1-42的氨基酸序列为：