[发明专利]鼠伤寒沙门菌aroA和luxS双基因缺失株及其制备的弱毒疫苗

说明书

本发明提供了一种鼠伤寒沙门菌aroA和luxS双基因缺失株及其制备的弱毒疫苗，其中的鼠伤寒沙门菌aroA和luxS双基因缺失株，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC NO.13736。该缺失株利用Red同源重组方法缺失aroA和luxS两个基因得到，所以毒力得到显著降低，制备得到的鼠伤寒沙门菌双基因缺失弱毒疫苗免疫保持良好，所以可以用于制备防治鼠伤寒沙门菌感染的鼠伤寒沙门菌双基因缺失弱毒疫苗。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种鼠伤寒沙门菌aroA和luxS双基因缺失株及其制备的弱毒疫苗。

背景技术

沙门菌是一种重要的食源性人兽共患病病原菌，不仅能引起多种畜禽疾病(鸡白痢、鸡伤寒、鸡副伤寒、猪副伤寒等)，造成全身性败血症和肠炎，给养殖业造成严重经济损失，而且能够通过污染食物引起人类食物中毒，对人类健康造成严重威胁。鼠伤寒沙门菌可以感染很多家禽、家畜、鼠、鸟和冷血动物，且蝇、蚤可带菌传播。人类通常是由于摄入被污染的蛋类或未完全煮熟的肉类而感染沙门菌，而且，鼠伤寒沙门菌感染的发病率居沙门菌感染的首位，可导致医院感染和暴发性食物中毒，病死率较高，因此造成的危害和经济损失巨大。

目前，主要采用抗生素类药物来预防和治疗鼠伤寒沙门菌病，但由于抗生素的广泛使用，导致了鼠伤寒沙门菌的耐药性和耐药谱的不断变化。另外，大量使用抗生素，极易造成畜禽产品出现药物残留，进而直接影响食品的安全，这不仅关系到畜牧业生产和畜牧业经济的发展，还关系到人类的身体健康和生存环境。因此，国内外逐渐采用疫苗接种的方法来预防沙门菌感染。

但是，由于沙门菌灭活苗需要经皮下多次接种，使用不方便，且不能诱导产生消化道局部保护力和细胞免疫，无法提供有效的保护效果。而弱毒活疫苗能够模拟自然感染状况，可以诱导细胞、体液和黏膜免疫，免疫力坚实，免疫期长。因此，利用基因工程技术构建基因缺失株，用作新型减毒活疫苗的研究备受关注。

国内外的研究表明，调控基因以及代谢相关基因的缺失、改造和修饰，都可以降低细菌的毒力，如aroA和luxS等，其中aroA基因编码芳香族氨基酸生物合成途径中的3-烯醇丙酮酰莽草酸-5-磷酸合成酶，该基因的功能缺失导致细菌的生长需要酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸等，在缺乏这些代谢产物的情况下，细菌的生长会受到抑制。此外，aroA突变株所需要的芳香族代谢产物没有在脊椎动物组织中发现，包括人体组织，确保了其在哺乳动物体内有限的复制，减少了在野外条件下散毒的风险。而luxS基因是构成LuxS/AI-2型密度感应系统的关键基因，对沙门菌的致病力具有重要的调控作用。

发明内容

本发明提供鼠伤寒沙门菌aroA和luxS双基因缺失株及其制备的弱毒疫苗，以达到安全预防鼠伤寒沙门菌感染的作用。

为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

本发明提供了一种鼠伤寒沙门菌aroA和luxS双基因缺失株，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.13736。

进一步的，本发明还提供了一种上述的鼠伤寒沙门菌aroA和luxS双基因缺失株在制备鼠伤寒沙门菌双基因缺失弱毒疫苗中的应用。

进一步的，本发明还提供了一种采用上述的鼠伤寒沙门菌aroA和luxS双基因缺失株制备得到的鼠伤寒沙门菌双基因缺失弱毒疫苗。

发明作用与效果

本发明构建提供的鼠伤寒沙门菌aroA和luxS双基因缺失株及其应用以及由其制备的弱毒疫苗，构建得到的鼠伤寒沙门菌aroA和luxS双基因缺失株，其毒力明显降低，且可以显著降低细菌在感染宿主体内的增殖能力，制备得到的鼠伤寒沙门菌双基因缺失弱毒疫苗免疫保持良好，所以可以用于制备防治鼠伤寒沙门菌感染的鼠伤寒沙门菌双基因缺失弱毒疫苗。

附图说明