[发明专利]尿液中游离甲氧基肾上腺素类物质的检测方法

说明书

本发明涉及一种尿液中游离甲氧基肾上腺素类物质的检测方法，包括如下步骤：所述游离甲氧基肾上腺素类物质包括甲氧基肾上腺素、甲氧基去甲肾上腺素和3‑甲氧酪胺；样品前处理：在尿液样品中加入混合内标溶液，经过固相萃取得洗脱液，吹干，加入复溶液，得待测样品；采用液相色谱串联质谱仪对所述待测样品进行检测。上述检测方法可以实现尿液中甲氧基肾上腺素类物质的定性和定量检测，具有前处理简单，有效去除了干扰物质，灵敏度高，特异性强，定性、定量功能强大，准确性好，并且整个检测过程时间短、检测通量高。

技术领域

本发明涉及医学检测技术领域，特别是涉及一种尿液中游离甲氧基肾上腺素类物质的检测方法。

背景技术

血液和尿液中的甲氧基肾上腺素类物质以游离形式和与硫酸或葡萄糖醛酸结合的方式存在。儿茶酚胺类物质在体内调节基本生理功能，能帮助调节血流量和血压，在机体应激状态下扮演着重要角色。甲氧基肾上腺素类物质一方面来源于儿茶酚胺类激素，一方面直接来源于嗜铬细胞瘤。

基于液相色谱-质谱联用检测的内分泌性疾病的代谢产物目前已广泛应用于各种高端实验室，可以更有效、更准确、快速地检出嗜铬细胞瘤相关激素水平。目前常用的儿茶酚胺代谢物的检测方法主要有放射酶学法、化学发光法、荧光法和高效液相色谱法等，这些检测方法主要存在以下一些问题：第一，样品前处理过程复杂，并且需要起始样品量较大；第二，现有检测技术过程时间长，实验误差较大，通量低；第三，由于肾上腺素和甲氧基去甲肾上腺素分子量一样，结构非常类似，无法用常规检测方法区分，特异性较差。

主要问题如下：

1、24h尿液儿茶酚胺物质免疫学检测方法成本高、易出现假阳性。

2、24h尿液中去结合性甲氧基肾上腺素类物质检测由于部分可来自消化道而易产生假阳性。

专利CN201610935910.8高通量液相色谱串联质谱的检测方法以及检测4种儿茶酚胺代谢物的方法专利中，检测过程涉及样品制备、衍生化反应、样品前处理、液相色谱分离以及串联质谱检测等步骤，样品前处理复杂衍生化过程过于复杂且耗时较长。

因此，本领域技术人员迫切需要一种前处理简单、检测快速、方法灵敏度高、特异性强的适用于尿液游离甲氧基肾上腺素类物质的检测方法。

发明内容

基于此，本发明提供一种前处理简单、检测快速、方法灵敏度高、特异性强的适用于尿液游离甲氧基肾上腺素类物质的检测方法。

具体的技术方案如下：

一种尿液中游离甲氧基肾上腺素类物质的检测方法，包括如下步骤：

所述游离甲氧基肾上腺素类物质包括甲氧基肾上腺素、甲氧基去甲肾上腺素和3-甲氧酪胺；

样品前处理：在尿液样品中加入混合内标溶液，经过固相萃取得洗脱液，吹干，加入复溶液，得待测样品；

所述混合内标溶液为含有甲氧基肾上腺素内标物、甲氧基去甲肾上腺素内标物和3-甲氧酪胺内标物的甲酸水溶液；

采用液相色谱串联质谱仪对所述待测样品进行检测：

液相色谱条件为：采用反向色谱柱；流动相：A相为甲酸含量为0.1-0.3wt％的水溶液，B相为甲酸含量为0.1-0.3wt％的甲醇溶液，采用梯度洗脱；

质谱条件为：正离子模式，扫描方式为多反应监测离子扫描。

在其中一些实施例中，所述液相色谱条件为：

色谱柱：反相Agilent Pursuit PFP色谱柱；

流动相的流速为：0.2-0.5mL/min；

柱温为28-32℃；

梯度洗脱方式为：