[发明专利]耐脂蛋白干扰的抗人Lp‑PLA2蛋白的单克隆抗体及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物医药工程技术领域，尤其涉及一种耐脂蛋白干扰的抗人Lp-PLA2蛋白的单克隆抗体及其应用。

背景技术

动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)是冠心病、脑卒中、外周血管病的主要原因。脂质代谢障碍及其伴发的血管炎症为动脉粥样硬化的病变基础，其特点是受累动脉病变从内膜开始，一般先有脂质和复合糖类积聚、出血及血栓形成，进而纤维组织增生及钙质沉着，并有动脉中层的逐渐蜕变和钙化，导致动脉壁增厚变硬、血管腔狭窄。病变常累及大中肌性动脉，一旦发展到足以阻塞动脉腔，则该动脉所供应的组织或器官将缺血或坏死。由于在动脉内膜积聚的脂质外观呈黄色粥样，因此称为动脉粥样硬化。

脂蛋白相关磷脂酶A2(Lipoprotein associated phospholipase A2),是磷脂酶A2超家族中的一员，是由441个氨基酸残基组成的一种丝氨酸磷脂酶。最初发现其能够降解血小板活化因子，因此又被称为血小板活化因子乙酰水解酶(Platelet activating factor acetylhydrolase，PAF-AH)。Lp-PLA2由血管内膜中的巨噬细胞、T细胞和肥大细胞分泌。动脉粥样硬化斑块中Lp-PLA₂表达上调，并且在易损斑块纤维帽的巨噬细胞中有很高的表达^[1]。血液中90％以上的Lp-PLA2与氧化型低密度脂蛋白相结合，通过水解氧化低密度脂蛋白中的氧化磷脂，生成脂类促炎物质，进而产生多种致动脉粥样硬化作用，包括内皮细胞死亡和内皮功能异常，刺激粘附因子和细胞因子的产生。这些物质可通过趋化炎症细胞进一步产生自我强化的循环，生成更多促炎物质^[2]。

国外大量研究均表明，随着Lp-PLA2水平升高，患冠心病和脑卒中风险增加，尤其对于老年人和无症状的动脉粥样硬化疾病人群^[3-6]。卓明峰等人^[7]对138例患者的研究表明，具有颈动脉斑块组的Lp-PLA2浓度明显高于颈动脉正常组及颈动脉内膜中膜增厚组(P<0.05)，说明Lp-PLA2能够反映颈动脉粥样硬化病变的严重程度，尤其是斑块的有无及稳定性。杨丽等^[8]针对299例拟诊断冠心病患者的研究表明，冠心病组血浆Lp-PLA2水平显著高于对照组(P<0.01)，表面血液Lp-PLA2升高是冠心病的独立危险因素之一，与冠脉病变的严重程度及动脉粥样硬化斑块的稳定性相关。

Lp-PLA2是一种对心脑血管疾病的预测及预后判断十分有力的生化标志物，能够为疾病的预防和早期干预提供新的思路和方向。目前国内无法生产能够应用于临床诊断的抗Lp-PLA2的单克隆抗体。Lp-PLA2在血液中绝大部分与脂蛋白相结合，基于重组抗原生产的Lp-PLA2单克隆抗体针对的抗原表位很可能被脂蛋白遮盖，使得这些单克隆抗体无法准确识别血液中的天然Lp-PLA2蛋白，增加了诊断用单克隆抗体的开发难度。因此开发具有自主知识产权的耐脂蛋白干扰的抗Lp-PLA2单克隆抗体对于研发心脑血管疾病检测试剂具有非常重要的意义。

参考文献：

[1]Je11inger PS,Smith DA,MehtaAE,eta1.American Association of C1inica1 Endocrino1ogists'Guide1ines for Management of Dys1ipidemia and Prevention of Atherosc1erosis[J].EndocrPract,2012,18Supp1 1:1-78.

[2]Sudhir K.C1inica1review:Lipoprotein-associated phospho1ipase A2，a nove1inf1ammatory biomarker and independent risk predictor for cardiovascu1ar disease[J].J C1in Endocrino1Metab,2005,90(5):3100-3105.