[发明专利]耐脂肪酸干扰的抗人心型脂肪酸结合蛋白的单克隆抗体及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物医药工程技术领域，尤其涉及一种抗干扰能力强的抗人心型脂肪酸结合蛋白的单克隆抗体及其应用。

背景技术

急性冠状动脉综合征是以冠状动脉粥样硬化斑块破裂或侵袭，继发完全或不完全闭塞性血栓形成为病理基础的一组临床综合征，包括不稳定心绞痛和急性心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)。AMI是心血管疾病的主要类型，近十年来，我国AMI的发病率一直呈上升趋势，已接近国际平均水平。AMI起病突然，急性期死亡率约为30％，其诱发原因主要是为心脏供血的冠状动脉堵塞，导致由其供血的心肌细胞缺血发生变性坏死。目前，国际上治疗AMI的最佳方法是早期快速确诊并进行急性冠状动脉介入治疗。

心电图的观察是诊断AMI的常用手段，但对于那些心电图正常的AMI患者，选择一种合适的生化指标来诊断AMI是十分必要的。目前常用的诊断标志物有肌红蛋白(myoglobin，Myo)、心肌肌钙蛋白I(caidiac troponin I，cTnI)和肌酸激酶同工酶(creatine kinase isoenzyme-MB，CK-MB)。但是Myo指标不能区分骨骼肌损伤和心肌损伤；而cTnI指标虽然特异性高，但在AMI发生6-8小时后浓度才明显上升；CK-MB指标也存在特异性差，对心肌微小损伤不敏感等缺点。心脏型脂肪酸结合蛋白(heart-type fatty acid binding protein，H-FABP)则克服了以上缺点，对于早期诊断AMI具有很好的特异性和敏感性，成为目前国内外研究较多的AMI早期诊断指标。

H-FABP是一种由132个氨基酸组成的可溶性胞质蛋白，分子量约为15kDa^[1]。H-FABP特异地大量存在于心肌组织中，占心脏全部可溶性蛋白的4％-8％，在骨骼肌、肾小管、脑组织、乳腺、胎盘组织中也有少量分布。H-FABP能够与心肌中的长链脂肪酸结合，为心肌收缩提供能量^[2]。正常人的血浆和尿中不含或含有极低含量的H-FABP，而当心肌细胞受到损伤后，H-FABP迅速释放至血液中，损伤后1-3小时就可以检测到其存在，6-8小时血液中的浓度达到峰值，12-24小时后又可以恢复正常^[3,4]，其动力学与Myo一致，但特异性更高。因此，H-FABP可以作为AMI早期诊断和风险评估的一种优秀的生化指标^[5,6]。

释放到血液中的H-FABP大部分处于与长链脂肪酸结合的状态。但在制备诊断用单克隆抗体时，用来免疫动物和筛选抗体的抗原均为重组表达的H-FABP蛋白，因此所得单克隆抗体的识别位点可能位于脂肪酸结合区。由于血液中H-FABP分子上的抗体识别位点已被脂肪酸占据，无法被这些单克隆抗体所识别，因此基于这些单克隆抗体制备诊断试剂经常会得到假阴性的诊断结果。本领域迫切需要一种能够耐受脂肪酸干扰的抗H-FABP单克隆抗体，从而开发准确度高的诊断试剂。

参考文献：

[1]Karthik Viswanathan,Alistair S Hall,Julian H Barth.An evidence-based approach to the assessment of heart-type fatty acid binding protein in acute coronary syndrome.Clin Biochem Rev Vol 33February 2012:3-11.

[2]刘洪梅，黄体钢.心型脂肪酸结合蛋白在临床诊断中的研究进展[J].实用心脑肺血管病杂志，2006,14(5):417-418

[3]Hsu BG,Chen YC,Lee RP,Lee CC,Lee CJ,Wang JH.Fasting serum level of fatty acid binding protein 4positively correlates with metabolic syndrome in patients with coronary artery disease.Circulation Journal 2010；74:327-331.