[发明专利]检测致泻性大肠埃希氏菌的核酸组合及其检测试剂盒与应用

说明书

技术领域

本发明涉及检验检疫技术领域，具体而言，涉及检测致泻性大肠埃希氏菌的核酸组合及其检测试剂盒与应用。

背景技术

核酸检测技术作为分子生物学检测技术的核心，在致泻性大肠埃希氏菌检测中发挥着巨大作用。目前市面上致泻性大肠埃希氏菌检测试剂盒及其检测分型方法主要为常规定性PCR，实时荧光PCR及基因芯片技术等。常规定性PCR操作简单，但过程繁琐，需通过琼脂糖凝胶电泳检测结果，检测灵敏度低，且检测过程中使用高致癌染料(EB)，对环境及人体危害非常大；实时荧光PCR检测灵敏度高，但其设备昂贵、对操作人员专业素质、引物及模板质量要求高，且不同品牌间产品重复性及重现性不佳；使用常规定性PCR及实时荧光PCR法单次反应只能筛检一种或几种指标，而且价格较高；无法满足单次反应针对五种致泻性大肠埃希氏菌进行筛检的需求。新型的基因芯片法利用核酸杂交原理，将待测样品特异性探针固定于固相/液相芯片上，可同时检测多种致泻性细菌指标，但其配套设备昂贵，通常用于科研工作中。针对致泻性大肠埃希氏菌检测试剂盒及其检测分型方法，目前还没有较全面的应用到基因芯片法。

因此研发一种操作简单、方便、灵敏、快捷、成本低、通量高且肉眼可视的检测方法和试剂盒成为了一个迫切的需要。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种检测致泻性大肠埃希氏菌的核酸组合，该核酸组合能快速高效的检测区分出不同类型的大肠杆菌，结果准确可靠。

本发明的第二目的在于提供上述的核酸组合在制备致泻性大肠埃希氏菌的检测试剂盒中的应用。

本发明的第三目的在于提供一种致泻性大肠埃希氏菌的检测试剂盒，该检测试剂盒能方便使用于大肠杆菌的分型检测。

本发明的第四目的在于提供上述的检测试剂盒在致泻性大肠埃希氏菌分型中的应用。

为了实现本发明的上述目的，采用以下技术方案：

一种检测致泻性大肠埃希氏菌的核酸组合，核酸组合包括检测引物组合；检测引物组合包括第1-14引物对，第1-14引物对的碱基序列分别如SEQ ID No.1-28所示。

进一步地，上述的核酸组合，还包括检测探针，该检测探针包括第1-14检测探针、阳性对照探针和阴性对照探针，第1-14检测探针的碱基序列分别如SEQ ID No.29-42所示，阳性对照探针的碱基序列如SEQ ID No.43所示，阴性对照探针的碱基序列如SEQ ID No.44所示；检测探针的5’端带有作为吸附剂的amino linker C6。

上述的核酸组合在制备致泻性大肠埃希氏菌的检测试剂盒中的应用。

一种致泻性大肠埃希氏菌的检测试剂盒，该检测试剂盒包括上述的核酸组合；检测引物组合的各引物对中的正向引物的5’端或反向引物的5’端带有生物素标记。

上述的检测试剂盒在致泻性大肠埃希氏菌检测分型中的应用。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：本发明提供的检测致泻性大肠埃希氏菌的核酸组合，能够高效、准确的鉴定出各型大肠埃希氏菌，能避免误检的发生；将上述核酸组合应用于制备致泻性大肠埃希氏菌的检测试剂盒，能方便检测致泻性大肠埃希氏菌，该检测试剂盒操作简单、方便、灵敏、快捷、成本低、通量高且肉眼可视的检测方法具有非常广的应用市场及非常好的应用价值。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。

图1为本发明实验例1提供的膜芯片示意图；

图2为本发明实验例2提供的EPEC膜芯片模式图；

图3为本发明实验例2提供的EIEC膜芯片模式图；

图4为本发明实验例2提供的ETEC膜芯片模式图；

图5为本发明实验例2提供的EHEC膜芯片模式图；

图6为本发明实验例2提供的EAEC膜芯片模式图；

图7为本发明实验例2提供的混合大肠杆菌膜芯片模式图；

图8为本发明实验例3提供的混合大肠杆菌膜芯片检测结果图。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。