[发明专利]人用水痘病毒灭活疫苗及其制备方法

说明书

本发明涉及生物技术领域，具体提供一种人用水痘病毒灭活疫苗及其制备方法，是将β‑丙内酯与水痘病毒浓缩液按体积比1：2000～1：8000混合，在3～5℃条件下灭活12～36h，随后在34～37℃条件下水解1.5～3h，得到灭活病毒液；灭活病毒液经纯化、分装、冻干后制备成灭活疫苗。本方法制备的水痘病毒灭活疫苗安全、有效，接种反应轻微，对不适用减毒活疫苗的免疫功能低下的人群更适用。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及人用水痘病毒灭活疫苗及其制备方法。

背景技术

水痘和带状疱疹的病原体均为水痘-带状疱疹病毒(Varicella-zoster virus,VZV)。VZV属疱疹病毒科，为双链DNA病毒。

VZV是一种具有高度传染性的疱疹病毒，既可引发水痘，也可引发带状疱疹(herpes zoster，HZ)；前者通常见于儿童期和年轻成年人，后者则是潜伏VZV再活化和复制导致。在初次感染VZV后，病毒可在感觉神经节中保持休眠状态，这样的VZV再活化与免疫功能下降有关，多发生在老年人或免疫功能低下的人群中(Weinberg等人，Journal ofInfectious Diseases(2009)200：1068-77)。有些患者在HZ皮疹痊愈后与HZ相关的疼痛还会持续很长时间。

使用疫苗预防水痘的作用已在全球范围内得到认同。基于减毒活病毒(VZV Oka株)的水痘疫苗于上世纪70年代和80年代研制和进行临床试验。1984年，该疫苗首先在德国和瑞典获得上市许可。目前市售的有数种冻干水痘减毒活疫苗，可冰箱冷藏或冷冻。这些疫苗有的为单价疫苗(仅含VZV病毒成份)，有的则与麻疹、腮腺炎、风疹三联疫苗(MMR)制成联合疫苗。

研究表明单价水痘减毒活疫苗耐受性良好，健康儿童接种水痘疫苗后最常报告的不良事件均较轻微，其中包括注射部位轻度压痛、发红和皮疹。然而，活减毒疫苗可能不适用于免疫功能低下的患者。由VZV Oka株引起的罕见并发症包括肺炎、肝炎、带状疱疹脑膜炎、复发性带状疱疹、严重皮疹以及继发性VZV传播，这主要发生于免疫功能受损者或接种时有未被确诊的其他严重病症的患者。免疫功能低下的个体，包括患有血液恶性肿瘤的患者、经历免疫抑制治疗的患者、接受造血干细胞移植(HCT)或实体器官移植(SOT)的患者、HIV感染的患者和具有自身免疫性疾病的患者，具有相对于一般群体更高的发展HZ的发病率。此外，这些患者群体处于发展严重和威胁生命的并发症的增加的风险中。目前，对水痘的治疗没有特效药，以预防为主，只能通过接种水痘疫苗的方法预防感染VZV病毒，所以安全有效的水痘疫苗对高危人群免疫意义重大。

为适应上述免疫低下者使用该疫苗，目前研究人员已经研究开发了灭活疫苗、病毒样颗粒疫苗、亚单位疫苗、DNA疫苗。通过热灭活VZV或通过使用亚单位疫苗可以开发对于免疫功能低下受试者的更安全的疫苗(Cohen,J.I.,(2008)J.Infect.Dis.197(Suppl 2):S237-S241)。Redman等人(J.Infectious Diseases(1997)176:578-85)描述了通过在50℃加热而灭活的并导致1.2pfu/0.5mL的感染性病毒含量的灭活VZV疫苗。然而对于免疫功能低下的患者，即便该水平的感染性也是具有风险的。美国专利号为6214354和5997880提到了使用灭活VZV疫苗的潜能并公开了生产并测试热处理的疫苗的例子；默沙东公司的专利(CN 103167880A)中使用了γ辐射灭活VZV病毒来制造水痘灭活疫苗。如果开发了灭活VZV的方法，所述方法可制得在免疫功能低下的患者中安全并有效(即无感染性但保留其免疫原性和抗原性)的VZV样品，这将满足重大的医疗需要。