[发明专利]一种紫贻贝微卫星位点及应用

说明书

本发明涉及一种紫贻贝微卫星位点及应用，15个微卫星位点，其核酸序列分别为SEQ ID NO:1‑15，引物序列为P1‑P30；本发明从紫贻贝基因组DNA中筛选15个微卫星位点，并在微卫星重复序列两端的侧翼区设计特异性引物进行扩增，获得的产物具有高度的多态性和稳定性，可用于紫贻贝的群体遗传学、亲缘关系分析、分子标记辅助育种等领域。

技术领域

本发明属于分子生物学DNA标记技术领域，具体涉及一种紫贻贝微卫星位点及应用。

背景技术

紫贻贝(Mytilus edulis)俗称海虹，壳楔形，顶端尖，腹缘略直，背缘弧形。外表为紫褐色，内面紫黑色或黑色，有珍珠光泽。生活在浅海，以足丝附着岩礁等基质上。广泛分布于我国辽宁、山东、浙江等省沿海。肉供食用，干制品称为“淡菜”。近年来，由于对贻贝野生资源的过度开采和环境污染，导致紫贻贝的野生资源锐减，同时伴随着遗传多样性的急剧下降。近年来展开了其增殖放流及产卵场的保护和修复工作，人工育苗已取得成功，现在需要评估其资源现状及建立增殖放流的效果的评估机制以制定合理的放流计划，这对保护与恢复海洋多样性具有重要意义。

微卫星DNA(Microsatellite DNA)是近年来飞速发展的遗传分子标记的一种。它是以2-6个碱基的短核苷酸为基本单位重复串联而成序列，一个微卫星表达可达几十到几百个bp，由于重复次数不同以及重复程度的不完全造成了每个位点的长度多态性。由于每个微卫星两端的序列多是相对保守的单拷贝序列，可根据其两端设计一对特异性引物，通过PCR技术来扩增相应位点的微卫星序列，再经电泳分析，即可显示不同基因型个体微卫星的多态性。微卫星由于分布广泛，密度大，多态性丰富，遵循孟德尔分离定律，共显性遗传、易于PCR扩增，所需DNA数量极少，对DNA质量要求不高，结果重复性好等优点，目前已被广泛应用于遗传多样性、亲缘关系分析、连锁图谱构建、功能基因定位、分子标记辅助育种(Marker-assisted Selection，MAS)等领域。特别对于水生生物，由于其生存环境等原因，利用微卫星作为标记可在没有物理标记的情况下区分混养个体所属家系，可促进育种工作的开展及提供其育种效率。因此，选用有效的微卫星标记对于紫贻贝的保护和合理开发利用具有重要意义。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对上述现有技术现状而提供一种紫贻贝微卫星位点及多态性引物，共提供30个紫贻贝的微卫星位点，以及相对应的引物，为紫贻贝的种群遗传学、家系鉴定及分子标记辅助育种技术提供有效的工具。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：提供30个微卫星位点，其核酸序列分别为SEQ ID NO:1-15。

本发明还提供了上述15个微卫星位点的引物对，从序列为SEQ ID NO：1的微卫星位点上设计的引物对，其上下游引物分别为P1和P2，

其中P1：5’-ACCTGTTTACGACAGGGTGC-3’；

P2:5’-CACCCCTCTTTTGAGGGTAA-3’。

从序列为SEQ ID NO：2的微卫星位点上设计的引物对，其上下游引物分别为P3和P4；

其中P3：5’-TTGGTAGAATTATCCCTTTTAATGA-3’；

P4：5’-GGGAGGGTAATTTTGGGCTA-3’。

从序列为SEQ ID NO：3的微卫星位点上设计的引物对，其上下游引物分别为P5和P6；

其中P5：为5’-CGGCATTCCTTTACACTTCC-3’；

P6：5’-GCGATAGTAGCATGTTGGAAA-3’。

从序列为SEQ ID NO：4的微卫星位点上设计的引物对，其上下游引物分别为P7和P8；