[发明专利]鸭抗原转运相关蛋白TAP2单克隆抗体及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了鸭抗原转运相关蛋白TAP2单克隆抗体及其制备方法和应用。本发明首先提供了一株稳定分泌鸭抗原转运相关蛋白TAP2单克隆抗体的杂交瘤细胞株；本发明进一步提供了构建所述杂交瘤细胞株的方法，包括：构建表达TAP2的原核表达质粒；诱导原核表达质粒表达TAP2蛋白，将表达产物过镍柱，用咪唑洗脱液洗脱目的蛋白得到纯化的重组TAP2蛋白；用纯化的重组TAP2蛋白免疫BALB/c雌小鼠，将免疫脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合，筛选获得特异性抗体分泌最高的阳性单克隆株。免疫组织化学检测结果表明，本发明制备的TAP2单克隆抗体(1A6)具有特异性生物学功能，能应用于检测动物组织或细胞内的TAP2蛋白。

技术领域

本发明涉及鸭抗原转运相关蛋白TAP2单克隆抗体以及分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞株，本发明进一步涉及它们在免疫组化中的应用，属于 TAP2单克隆抗体领域。

背景技术

抗原处理相关转运体(Transporter associated with antigen processing,TAP)是一种异二聚体跨膜转运蛋白，TAP1/TAP2跨越内质网膜6次形成“匙孔”样结构。肿瘤抗原和病毒编码蛋白等内源性抗原，被抗原递呈细胞(APC)内的蛋白酶复合物水解成8-10个氨基酸的短肽。肽首先与“匙孔”的胞浆区结合，ATP结合在TAP1/TAP2的羧基端，水解导致异二聚体构型改变，开放跨膜通道，暴露膜内区的结合位点，肽段被转运于内质网腔内。在Tapasin、钙连蛋白和钙网蛋白等分子伴侣的协同作用下与内质网中新合成组装完整的MHCIα/β2m分子上的肽结合槽结合，形成稳定的MHC I-抗原肽复合物。分泌至APC细胞表面，被CD8+T细胞识别并引起免疫应答。TAP蛋白对MHC I类分子在细胞膜上表达的密度和稳定性起重要作用：TAP分子缺陷或表达降低，可导致MHC I类分子因没有荷载抗原肽而无法在细胞表面稳定表达。

不同种属动物的TAP基因均位于MHC核心区域，但大小和基因组位置各不相同。火鸡的TAP基因还没有明确鉴定，但是已通过序列分析获得了功能和序列类似的MDR/TAP基因。鸡TAP2基因与优势表达的MHC 经典I类分子a链编码基因BF2紧密相连。鹌鹑TAP基因结构更为复杂，与经典I类分子4个拷贝基因相邻。鸭有TAP1和TAP2两个反向转录的拷贝基因，其中TAP2与MHCI类分子5个拷贝基因中的优势表达基因UAA毗邻。

在机体被致病性病毒侵袭或有应激的情况下，如果TAP基因组序列发生突变或其调节机制出现缺陷，均可以导致TAP蛋白的活性下降和表达下调，导致肿瘤抗原不能被有效地转运，使肿瘤逃逸免疫监视，最终引起病毒性感染或发生肿瘤。

TAP基因的多态性与多种疫病的种族敏感性有关，相关度较高的有鼻咽癌(黄种人较白种人患病多)、原发性黑色素瘤、乳腺癌、汉族食管癌以及人乳头瘤病毒导致的宫颈癌等，但免疫遗传学分子机制尚未阐明。鸭的人工驯化时间较短，家鸭的遗传资源丰富度远大于家鸡，是良好的免疫遗传研究的模式动物。利用TAP基因纯合的无特定病原体实验动物化鸭群感染鸭瘟或禽流感后，不同单倍型鸭的血清抗体效价或致病性不同，表明鸭TAP基因有可能作为病毒病免疫遗传机制研究的候选靶基因。

发明内容

本发明所要解决的第一个技术问题是提供一株稳定分泌鸭抗原转运相关蛋白TAP2单克隆抗体的杂交瘤细胞株；

本发明所要解决的第二个技术问题是将所述杂交瘤细胞株分泌的鸭抗原转运相关蛋白TAP2单克隆抗体应用于检测在动物组织或细胞内表达的TAP2蛋白。

为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案是：