[发明专利]一种快速获取转基因玉米草甘膦耐受性表型的方法

权利要求书

1.一种快速获取转基因玉米草甘膦耐受性表型的方法，其特征在于，包括：

S1：种植同等数量的转基因玉米和非转基因玉米，在玉米生长过程中，对一部分数量的转基因玉米和非转基因玉米喷施浓度为1080g a.e.ha^-1的草甘膦溶液作为实验组，对剩余的转基因玉米和非转基因玉米喷施等量的水作为对照组；

S2：通过制定莽草酸标准曲线结合紫外分光光度法，获得受草甘膦胁迫不同天数的转基因玉米和非转基因玉米的植株冠层叶片的莽草酸含量；

S3：利用高光谱成像系统，获取受草甘膦胁迫不同天数的转基因玉米和非转基因玉米的植株冠层的高光谱数据，得到样本在可见近红外波段的吸光度；

S4：采用小波变换对高光谱数据预处理，去除噪声并剔除异常样本；

S5：对经过预处理的高光谱数据进行特征波长选择；

S6：通过SPXY方法将实验组和对照组内的样本分为建模集和预测集；

S7：以建模集内样本的特征波长的反射率值作为输入变量，步骤S2中测量得到的莽草酸含量作为输出变量，建立LSSVM回归分析模型；

Y＝56967.52*λ₁+41852.64*λ₂-55015.29*λ₃+2881.984*λ₄+9109.073*λ₅-95879.78*λ₆+42727.5*λ₇-18709.43*λ₈+99941.35*λ₉-132229.1*λ₁₀+52584.88*λ₁₁+107.4436*λ₁₁+38980.16*λ₁₃-1926.05*λ₁₄+22470.85*λ₁₅-773.9245*λ₁₆+194.71162

其中，Y为莽草酸含量，λ₁～λ₁₆分别为高光谱数据中对应的玉米样本的反射率计算所得的吸光度；

S8：将预测集内样本的特征波长对应的吸光度输入所述的LSSVM回归分析模型，得出预测集内各样本的莽草酸含量。

2.如权利要求1所述的快速获取转基因玉米草甘膦耐受性表型的方法，其特征在于，在步骤S1中，分别种植120盆转基因玉米和非转基因玉米，其中转基因玉米内转入cry1Ab/cry2Aj-G10evo基因，在玉米生长至3叶期时，将草甘膦溶液置于便携式CO₂高压喷雾器中，分别对80株转基因玉米和非转基因玉米植株进行喷施作为实验组，喷施压力为23lb pol^-2，喷施量为120L ha^-1，在同等条件下，分别对40株转基因玉米和非转基因玉米植株喷施等量的水作为对照组；

在喷施后的第2、4、6、8天各取转基因玉米和非转基因玉米各20株，喷施水的转基因玉米和非转基因玉米各10株进行实验，共有实验样本240个。

3.如权利要求1所述的快速获取转基因玉米草甘膦耐受性表型的方法，其特征在于，在步骤S2中，获取样本内莽草酸含量的具体过程如下：

S2.1：获取莽草酸提取物：每个样本取0.1g叶片加入1.5ml的0.25mol/L的HCl提取液中，在冰浴状态下迅速碾磨，于12000r/min离心10min，收集离心上清液；

S2.2：测定莽草酸提取物的OD值：取200μl的离心上清液加入微量滴定板上，加入2ml浓度为1％的高碘酸，3h后，加入2ml的1mol/L的NaOH溶液，再加入1.2ml的0.1mol/L的甘氨酸，混匀后放置5min，在紫外分光光度计380nm下比色，记录OD值；

S2.3：测定莽草酸标准品的OD值并绘制莽草酸标准品的浓度与OD值的标准曲线：将sigma莽草酸标准品10mg溶于1.5ml、0.25mol/LHCL中，取0、1、2.5、5、10μl加入0.25mol/LHCL至1.0ml，用测定莽草酸标准品OD值，并绘制莽草酸标准品的浓度与OD值的标准曲线，计算得到每个样本的莽草酸含量。