[发明专利]一种基于胶体金法检测尿液中HIV（1+2）抗体试剂

说明书

技术领域

本发明涉及一种体外诊断试剂及其使用方法，特别涉及一种检测人尿液中HIV(1+2)抗体的检测方法。

背景技术

现有HIV尿液抗体检测试剂，用的是酶联免疫法，该方法仅限于检测HIV-1抗体，且需要专用的仪器设备，检测时间长，必须由专业人员操作。

研发一种快速的并能用于自检的HIV(1+2)尿液抗体检测试剂是有必要的。

发明内容

本发明提供一种基于胶体金法检测尿液中HIV(1+2)抗体试剂的制备方法，以胶体金标记的SPA偶联抗人IgG抗体制备胶体金结合物垫，作为显色探针，在硝酸纤维素膜上混合包被gp41抗原和gp36抗原，作为检测HIV 1型抗体和HIV 2型抗体的检测线。

其中的胶体金结合物垫的制备方法如下：

1)标记SPA，以0.2M碳酸钾调节胶体金PH在8.2左右，10～30μg/ml 金的比例加入SPA,反应30～60分钟后，以BSA或PEG进行封闭，封闭液的终浓度1～10mg/ml，10000rpm离心10～60分钟，弃上清，沉淀用含有2mg/ml BSA的10mM Tris-Hcl(pH8.2)缓冲液的复溶至原体积。

2)金标SPA偶联抗人IgG抗体，在上述复溶后的金标SPA溶液中，每毫升溶液中加入抗人IgG抗体0.1～10μg，反应60min，10000rpm 离心10～60分钟，弃上清，沉淀用含0.5％BSA、5％蔗糖、0.1％Triton X-100、0.03％proclin-300的10mM Tris-Hcl(pH8.2)的缓冲液复溶至原体积。

3)冷冻干燥，将上述金标溶液铺金后，-50℃预冻2小时后，抽真空进行升华冻干，制备胶体金结合物垫。

其中的胶体金结合物垫，通过金标SPA偶联抗人IgG抗体，使抗人 IgG抗体的有序性增强，即Fab端一致向外，增加有效抗体的数量，增强其结合尿液中游离蛋白的能力，同时，通过金标SPA偶联抗人 IgG，延长金标探针的手臂，增强其反应能力，提升产品的灵敏度。其中，在硝酸纤维素膜上混合包被的gp41抗原浓度为0.5～2.5mg/ml, gp36抗原浓度为0.1～0.5mg/ml。

本发明进一步提供一种检测体系，所述检测体系主要包括，SPA，胶体金，BSA，PEG，Tris-Hcl缓冲液，抗人IgG，蔗糖，Triton X-100， proclin-300等成分。

本发明所述检测体系即实施例中所述检测卡，检测卡包括硝酸纤维素膜、金标垫，吸水纸、胶板和塑料卡壳等，检测卡设有检测线显示部分和样本加样孔，其中的金标垫按照本发明方法制备。

其他所需物品如铝箔袋、塑瓶、干燥剂、说明书也属于本发明的范畴。本发明的优点在于：

1、通过金标SPA并偶联抗人IgG抗体，使抗体的有序性增强，即 Fab端一致向外，增加有效抗体的数量，增强其结合尿液中游离蛋白的能力。通过金标SPA偶联抗人IgG抗体，延长金标探针的手臂，增强其反应能力，提升产品的灵敏度。

2、检测效率提高，与酶免尿检试剂相比，检测时间显著缩短，结果 15min判读；

以下为本发明技术方案和现有技术方案实施效果比较表：

附图

图1生产工艺流程图

图2检测结果的判定

图3阳性尿20例检测结果：

图4阴性尿20例检测结果：

图5均一性试验结果：

图6本发明检测卡示意图

具体实施方式

以下通过实施例进一步说明本发明，但不作为对本发明的限制。

实施例1

具体实施的关键步骤如下：

步骤一：取100ml 40nm胶体金溶液，金浓度0.03％，加入1ml 0.2M 碳酸钾，搅拌中加入4ml SPA(5mg/ml)，反应60分钟后，加入1ml 20％BSA，反应60分钟，10000rpm离心30分钟，弃上清，沉淀用含有2mg/ml BSA的10mM Tris-Hcl(pH8.2)缓冲液复溶至100ml。步骤二：在上述复溶后的金标SPA溶液中，加入抗人IgG抗体100μl (10mg/ml)，反应60min，10000rpm离心30分钟，弃上清，沉淀用含0.5％BSA、5％蔗糖、0.1％Triton X-100、0.03％proclin-300的10mM Tris-Hcl(pH8.2)缓冲液复溶至100ml。